化工儀器網
技術文章
安捷倫氣質聯用分析沙坦類藥物中的亞硝胺雜質
閱讀：378 發(fā)布時間：2024-9-10為應對氦氣短缺問題，實驗室正在探索用于氣質聯用 (GC/MS) 分析的替代載氣。本應用簡報將 Agilent 8890 氣相色譜系統(tǒng)與配備高效離子源 (HES) 的 Agilent 7010 系列三重四極桿 (TQ) GC/MS 系統(tǒng)聯用，或與配備 Agilent HydroInert 離子源的 Agilent7000E 三重四極桿 GC/MS 聯用，證明了氫氣作為載氣用于分析某些沙坦類藥物中的八種亞硝胺雜質的適用性，并與氦氣進行了比較。使用氫氣作為載氣分析 8 種亞硝胺雜質，其 NIST 檢索匹配分數在 79 到 97。在 0.3–50 ng/mL 的濃度范圍內獲得了出色的校準線性，R2 > 0.99。當濃度為 0.03 ppm 的時候，滿足信噪比 (S/N) 為 10的要求。OpenLab ECM XT 與 MassHunter 采集軟件 13.0 的集成簡化了數據管理，為分析人員提供了對儀器所生成的數據的集中訪問，可促進協作、保持數據可靠性并優(yōu)化工作流過程。
前言多年來，氦氣供應一直是一個問題，這導致對以包括氫氣在內的其它可用氣體作為載氣的關注顯著上升。雖然氫氣是一種高效的 GC 載氣，但了解其與分析物的反應性對于獲得準確的結果至關重要。與氦氣相比，氫氣具有一些優(yōu)勢，包括分析速度更快且色譜分離度更出色。然而，氫氣也面臨一些挑戰(zhàn)，例如可能導致靈敏度降低以及氫氣與樣品分析物發(fā)生反應所引起的譜圖變化。這些反應會改變總離子流色譜圖 (TIC) 中峰的質譜圖，可能導致化合物鑒定出錯。從氦氣換用為氫氣作為載氣是一項重大變化，需要仔細規(guī)劃和執(zhí)行?！癊I GC/MS 儀器載氣由氦氣轉換為氫氣的指南[1]"提供了詳細說明來幫助實現載氣轉換。另外，安捷倫推出的 HydroInert 離子源能夠保留譜圖保真度，即使活性化合物在氫氣存在的情況下也是如此。目前以氫氣作為載氣已經在各種應用當中獲得成功，包括揮發(fā)性有機化合物[2]、多環(huán)芳烴 (PAHs)[3,4] 以及 EPA TO-15 中列出的目標化合物[5] 的分析。除這些熱門應用以外，另一項重要應用是藥品中亞硝胺雜質的分析。氦氣作為載氣被廣泛應用于分析藥品中的亞硝胺雜質。亞硝胺在某些條件下可能與氫氣發(fā)生反應，轉化為不需要的胺或肼。因此，使用氫氣作為載氣時確定譜圖質量不受影響非常重要。本應用簡報評估了以氫氣作為載氣，分別使用 HES和 HydroInert 離子源分析以下八種亞硝胺雜質的結果：亞硝基二甲胺 (NDMA)、N-亞硝基甲基乙胺 (NMEA)、N-亞硝基二乙胺 (NDEA)、N-亞硝基-乙基異丙胺 (NEIPA)、N-亞硝基二異丙胺 (NDIPA)、N-亞硝基二丙胺 (NDPA)、N-亞硝基二正丁胺(NDBA) 和 N-亞硝基哌啶 (NPIP)。對檢測結果從譜圖質量、線性、重復性、回收率以及與關于藥品中亞硝胺分析的現行法規(guī)的合規(guī)性方面進行了評估。
實驗部分所檢測的活性藥物成分 (APIs) 和藥品包括纈沙坦、厄貝沙坦、氯沙坦和奧美沙坦。準確稱取 500 mg 原料藥，置于一次性 15 mL 玻璃離心管中，并使用移液管加入 5 mL 內標溶液（約 50 ng/mL NDMA-d6 的二氯甲烷溶液）。將樣品渦旋1 min，然后放入離心機中，以 4000 rpm 離心 5 min。未溶解的原料藥沉降在底部。使用一次性移液器，將約 2 mL 二氯甲烷層通過 0.45 µm 尼龍過濾器過濾，然后轉移至 GC 樣品瓶中待分析。標樣配制稀釋標準品儲備液，以獲得 0.3–50 ng/mL 范圍內的校準溶液，并且使用含有作為內標的 NDMA-d6 的二氯甲烷進行配制。
儀器和分析將配備 Agilent 7693A 自動液體進樣器 (ALS) 的 8890 氣相色譜系統(tǒng)與配備 HES 的 7010 系列 GC/TQ 和配備 HydroInert 離子源的 7000E GC/TQ 聯用進行分析。采用 Agilent J&W VFWAXms 氣相色譜毛細管柱 (60 m × 0.25 mm, 0.25 µm)（部件號 CP9207）進行分離?；蛘?，可以使用包含兩根 Agilent J&WVF-WAXms 氣相色譜毛細管柱 (30 m × 0.25 mm, 0.25 µm)（部件號 CP9205）的柱中反吹配置應用相同的參數，流量分別為1 mL/min 和 1.2 mL/min。還對反吹裝置進行了評估。表 1 和表 2 分別提供了 GC 和 MS 參數。GC/TQ 在動態(tài)多反應監(jiān)測 (dMRM) 模式下運行。利用 GC/TQ的 Agilent MassHunter Optimizer 軟件優(yōu)化所有九種雜質的MRM 離子對，并將其用于數據采集（表 3）。
軟件和數據可靠性采用 Agilent MassHunter Workstation（包括用于 GC/MS的 MassHunter 采集軟件 13.0 和 MassHunter 定量分析軟件 12.1）進行數據采集和分析。OpenLab 電子內容管理系統(tǒng) (ECM) XT 配置提供了各種功能來確保符合各個國家/地區(qū)和歐盟電子記錄法規(guī)的要求。自動化工具和過程能夠創(chuàng)建具有相關權限的用戶、生成審計追蹤并支持遠程數據存儲，以盡可能降低數據泄露或丟失的風險。OpenLab ECM XT 與MassHunter 應用程序配合使用，提供了一種靈活的數據管理解決方案，能夠單點訪問由儀器、數據系統(tǒng)和實驗室軟件生成的數據。通過訪問存儲位置的數據，分析人員可以在不損害數據可靠性的情況下進行協作，并且能夠為工作流程創(chuàng)建一致的流程。
結果與討論譜圖匹配質量使用氦氣或氫氣作為載氣采集所有八種分析物的全掃描譜圖，然后與 NIST 譜庫進行比較。如圖 1 所示，使用氫氣作為載氣與 7010 系列 GC/TQ-HES 系統(tǒng)獲得了出色的匹配得分 (> 90)。當使用氫氣作為載氣與 7000E GC/TQ-HydroInert 離子源配置時，獲得了良好的匹配得分 (> 80)。使用 HES 獲得了更高的平均匹配得分可歸因于更高的靈敏度所帶來的更高的響應。保持質譜圖的完整性使氦氣和氫氣作載氣方法能夠使用相同的MRM 離子對（表 3）。
……
結論在 Agilent 8890 氣相色譜系統(tǒng)與 Agilent 7010 系列 GC/TQ(HES) 或 Agilent 7000E GC/TQ（HydroInert 離子源）聯用系統(tǒng)上使用氫氣作為載氣時，在沙坦類藥品和原料藥的八種亞硝胺藥物雜質的測定中表現出優(yōu)異的性能。在 0.03 ppm 下對性能進行了驗證，獲得了可接受的回收率和長期重復性。配備 HydroInert 離子源的 7000E GC/TQ 和配備 HES 離子源的7010 系列 GC/TQ 均有助于系統(tǒng)獲得所需的檢出限。OpenLabECM XT 與 MassHunter 采集軟件 13.0 的集成簡化了數據管理，為分析人員提供了對儀器所生成的數據的集中訪問，可促進協作、保持數據可靠性并優(yōu)化工作流過程。