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技術(shù)文章
改善農(nóng)藥分析的峰形并降低 LOQ
閱讀：85 發(fā)布時(shí)間：2024-11-21摘要本應(yīng)用簡報(bào)展示了使用 Agilent 1260 Infinity II Hybrid Multisampler，在安捷倫 FEED進(jìn)樣模式下對溶于強(qiáng)洗脫有機(jī)溶劑中的極性農(nóng)藥進(jìn)行多組分 LC/MS 分析。利用1260 Infinity II Hybrid Multisampler 以各種注入速度注入樣品，減輕溶劑效應(yīng)，并在色譜柱上捕獲和富集極性化合物。此技術(shù)可消除流穿現(xiàn)象，并提供更出色的峰形，從而改善檢測、定量和全自動(dòng)峰積分。此技術(shù)可以應(yīng)用于在 QuEChERS 樣品前處理中使用純乙腈提取水果和蔬菜中的農(nóng)藥并進(jìn)行分析的典型多組分分析方法。
前言極性化合物 LC/MS 分析的一個(gè)普遍問題是它們的色譜分離受到樣品溶劑洗脫強(qiáng)度的影響。隨著反相色譜中樣品溶劑洗脫強(qiáng)度的提高和進(jìn)樣量的增加，早洗脫極性化合物的出峰性能受到影響，甚至?xí)?dǎo)致流穿，出現(xiàn)溶劑前沿峰。HPLC 儀器的進(jìn)樣模式也對樣品中化合物的分離有很大影響?，F(xiàn)代 HPLC 儀器經(jīng)過充分優(yōu)化，以盡可能減小擴(kuò)散體積，從而獲得理想的出峰性能。遺憾的是，這種優(yōu)化使極性化合物在到達(dá)色譜柱柱頭時(shí)更有可能高度聚集在樣品溶劑中。為了防止峰分裂或流穿峰，通常利用夾層進(jìn)樣或增加混合器等方式來促進(jìn)極性化合物進(jìn)入起始溶劑中。1260 Infinity II HybridMultisampler 可通過 FEED 進(jìn)樣模式輸送樣品，無需改變流路即可將樣品與起始溶劑混合，且不影響出峰性能。此進(jìn)樣模式無需對液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行任何手動(dòng)干預(yù)。1260 Infinity II Hybrid Multisampler 還可以在經(jīng)典的流通式進(jìn)樣模式下操作：只需在方法設(shè)置中單擊鼠標(biāo)即可實(shí)現(xiàn)，能夠兼容之前的流通式進(jìn)樣方法。前文所述的分析挑戰(zhàn)經(jīng)常出現(xiàn)在蔬菜和水果的極性農(nóng)藥多組分分析中，因?yàn)樵赒uEChERS 樣品前處理流程中，農(nóng)藥最終溶于乙腈。
本應(yīng)用簡報(bào)展示了新開發(fā)的進(jìn)樣原理 FEED進(jìn)樣的應(yīng)用。此進(jìn)樣模式能夠通過樣品注入進(jìn)行溶劑調(diào)制，對溶于乙腈等溶劑中的極性農(nóng)藥（這是 QuEChERS 樣品前處理后的普遍情況）進(jìn)行多組分 LC/MS 分析。本文將介紹并討論通過樣品注入進(jìn)行溶劑調(diào)制對出峰性能的積極影響，以及通過增加進(jìn)樣量所獲得的最大靈敏度。
實(shí)驗(yàn)部分儀器– Agilent 1260 Infinity II HybridMultisampler (G7167C)– Agilent 1260 Infinity II 全能泵(G7104C)– Agilent 1290 Infinity II 高容量柱溫箱(G7116B)– Agilent Ultivo 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng) (G6465B)
色譜柱Agilent ZORBAX StableBond C18,2.1 × 100, 1.8 µm（貨號 858700-902）軟件– 用于 Ultivo LC/TQ 的 AgilentMassHunter 采集軟件 V1.1– Agilent MassHunter 定性分析軟件V10.0– Agilent MassHunter 定量分析軟件V10.0農(nóng)藥高滅
校準(zhǔn)將 8 種農(nóng)藥各自的儲備液混合，使?jié)舛冗_(dá)到 1000 ppb。將該溶液用乙腈稀釋，得到濃度為 100、20、10、2、1 和 0.2 ppb的一系列校準(zhǔn)溶液。樣品使用乙腈從草莓中提取的 QuEChERS 提取物：加標(biāo)了所有農(nóng)藥（加標(biāo)濃度為10 ppb）以及不加標(biāo)。樣品前處理
1. 稱取 10.00 ±0.01 g 均質(zhì)草莓樣品置于50 mL 離心管中2. 根據(jù)需要加標(biāo)，然后加入 10 mL 乙腈，加蓋并渦旋 1.5 分鐘
3. 加入 Agilent QuEChERS 萃取試劑盒，原始方法（貨號 5982-5550）萃取鹽(4 g) 并渦旋 1.5 分鐘
4. 以 4000 rpm 的轉(zhuǎn)速離心 4 分鐘
5. 將 6 mL 上清液轉(zhuǎn)移至 15 mL AgilentQuEChERS 分散式通用 SPE 管（貨號5982-5056）中
6. 渦旋 1.5 分鐘，然后以 4000 rpm 的轉(zhuǎn)速離心 4 分鐘7. 將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的試管中8. 使用 Agilent Captiva 優(yōu)級針頭過濾器（貨號 5190-5083）過濾到自動(dòng)進(jìn)樣器樣品瓶中
溶劑和化學(xué)品– 所有溶劑均購自德國 Merck 公司– 化學(xué)品也購自德國 Merck 公司– 新制超純水產(chǎn)自配置 LC-Pak Polisher和 0.22 µm 膜式終端過濾器 (Millipak)的 Milli-Q Integral 水純化系統(tǒng)
結(jié)果與討論為了證明進(jìn)樣模式（即，F(xiàn)EED 進(jìn)樣或流通式進(jìn)樣）的影響，將八種早洗脫極性農(nóng)藥的混合物溶于乙腈中，各化合物的最終濃度為 10 ppb。將此樣品以 0.5、1.0、1.5 和 2.0 μL 的不同進(jìn)樣量進(jìn)樣，考察兩種進(jìn)樣模式下的出峰性能。圖 1 突出顯示了兩種進(jìn)樣模式下第一個(gè)洗脫的農(nóng)藥MRM 定量離子峰形。當(dāng)進(jìn)樣量為 0.5 μL 時(shí)，F(xiàn)EED 進(jìn)樣獲得了峰形良好的峰（圖 1：A1）。在流通式進(jìn)樣模式下獲得的峰也具有良好的峰形，但峰頂略有分裂（圖 1：A2）。隨著進(jìn)樣量的增加，F(xiàn)EED 進(jìn)樣模式下的峰高增加，同時(shí)仍保持出色的峰形（圖 1：B1 至 D1）。相比之下，對于流通式進(jìn)樣模式，在進(jìn)樣量為 1.0 μL 時(shí)峰開始分裂（圖 1：B2）。在1.5 μL 和 2.0 μL 的更大進(jìn)樣量下，農(nóng)藥開始流穿，出現(xiàn)溶劑前沿峰（圖 1：C2 至 D2）。在兩種進(jìn)樣模式下，進(jìn)樣量為 1.0 µL 和1.5 μL 時(shí)采集的 8 種農(nóng)藥的結(jié)果如附錄圖 A 和 B 所示，其中顯示了 MRM 定量離子和定性離子峰。在兩種進(jìn)樣模式下，在 0.5 μL 的進(jìn)樣量下，洗脫時(shí)間晚于的化合物均表現(xiàn)出良好的峰形，且無分裂。但是，在流通式進(jìn)樣模式下，一些峰在 1.0 μL 的進(jìn)樣量下開始分裂（附錄：圖 A）。當(dāng)進(jìn)樣量為 1.5 μL 時(shí)，所有峰開始分裂或流穿，出現(xiàn)溶劑前沿峰（附錄：圖 B）。即使是最后一種農(nóng)藥（在大約 3.7 分鐘處洗脫），在進(jìn)樣量為 2.0 μL時(shí)也開始分裂。