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淺析光遺傳學(xué)技術(shù)在三箱社交行為實(shí)驗(yàn)中的測(cè)試方法與注意事項(xiàng)
閱讀：1487 發(fā)布時(shí)間：2021-3-221、 動(dòng)物三箱社交自由探索實(shí)驗(yàn)(three chamber free exploring test)
小鼠天性對(duì)新奇事物有好奇心，研究表明，與熟悉的環(huán)境相比，小鼠對(duì)不 熟悉的環(huán)境有更強(qiáng)探索yu望。本實(shí)驗(yàn)是在一個(gè)(20+8+20) *20cm的位置偏好箱 中完成的，包含左側(cè)箱、右側(cè)箱和中間箱(自由運(yùn)動(dòng)時(shí)小鼠從中間箱放入，避 免人為控制的左右箱進(jìn)入順序?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響)。自由探索實(shí)驗(yàn)(free exploring)以及后面將要提到的實(shí)時(shí)位置偏好實(shí)驗(yàn)均是用這種三箱裝置完成， 每套三箱設(shè)備使用不同的花紋的壁紙以及不同紋路地板作為不同環(huán)境。所用到 的壁紙有四種圖案，A.黑白星形格B.斜黑白條紋C.黑白方格D.豎直黑白 條紋,本文所用到的地板有兩張，地板1.左側(cè)平板，右側(cè)淺斜條紋；地板2.左 側(cè)空心圓格，右側(cè)空心條紋，將環(huán)境與地板配對(duì)使用。
環(huán)境自由探索實(shí)驗(yàn)旨在評(píng)價(jià)小鼠的探索行為，研究目標(biāo)腦區(qū)及環(huán)路在探索 行為中所起的作用。自由探索實(shí)驗(yàn)中，所用到環(huán)境為A.黑白星形格+B.斜黑白 條紋壁紙和地板1左側(cè)平板，右側(cè)淺斜條紋，每次實(shí)驗(yàn)前均需測(cè)試小鼠對(duì)三箱 環(huán)境偏好的基礎(chǔ)值，即baseline測(cè)定。
2、主要材料和設(shè)備
| 材料和設(shè)備 | 廠商信息 |
行為測(cè)試箱 | |
| 攝像頭 | 上海欣軟 |
| 攝像頭支架 | |
| 采集卡 | 上海欣軟 |
| SuperMaze動(dòng)物行為分析軟件 | 上海欣軟 |
| 473nm藍(lán)光激光器 | 杭州紐頓 |
3、三箱社交探索實(shí)驗(yàn)基本步驟
本文采用的自由探索行為實(shí)驗(yàn)(free exploring)包括連續(xù)三天的測(cè)試。
第YI天為基線baseline檢測(cè)，每只小鼠放入中央箱之后開(kāi)始自由探索，每 只小鼠探索時(shí)間為20min,軟件將自動(dòng)記錄小鼠運(yùn)動(dòng)軌跡、平均速度以及在各 箱所停留的時(shí)間進(jìn)入次數(shù)等參數(shù)，將其記為baselineo
第二天為training階段，用中間隔板將小鼠限制于某一側(cè)環(huán)境，讓其在zhi定的20*20cm單側(cè)箱內(nèi)自由探索，并同時(shí)給予473nm LED光照，刺激參數(shù) BLA/NAC均為20Hz, 15ms,光纖末端光強(qiáng)10mw左右。(為避免激光損輸出 傷，刺激模式為3s-on-3s-off不斷循環(huán)，直到20min測(cè)試時(shí)間束。)
第三天為test階段，位置偏好箱兩側(cè)均正常開(kāi)放，將小鼠置于中央箱，令 其自由探索20min,并利用軟件系統(tǒng)自動(dòng)記錄小鼠運(yùn)動(dòng)軌跡、平均速度以及在 各箱所停留的時(shí)間、進(jìn)入次數(shù)等參數(shù)，將其記為Test。
(環(huán)境探索實(shí)驗(yàn)使用的三箱環(huán)境為A.黑白星形格+ B.斜黑白條紋壁紙和地 板1左側(cè)平板，右側(cè)淺斜條紋。由于第二天training階段在zhi定封閉環(huán)境中給 光刺激20min,在第三天test時(shí)，與非刺激環(huán)境相比，該光刺激環(huán)境對(duì)于小鼠 而言是熟悉的環(huán)境(familiar),因此由于對(duì)不熟悉環(huán)境的探索天性，小鼠在 test階段理論上將對(duì)非光照的不熟悉環(huán)境表現(xiàn)出更強(qiáng)的偏好性。)
4、注意事項(xiàng)
(I) .為避免激光損傷，藍(lán)色激光刺激模式為間歇給光。
(II) .每次實(shí)驗(yàn)前，小鼠先放入彳丁為學(xué)室適應(yīng)半小時(shí)以上。
(III) .每只小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，應(yīng)用75%酒精*清潔實(shí)驗(yàn)箱，避免小鼠行為結(jié)果 受到上一只小鼠的氣味影響。
