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還在為小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果“頭疼”嗎？測試過程中這些細(xì)節(jié)您注意了嗎？
閱讀：1380 發(fā)布時(shí)間：2022-5-11小鼠懸尾測試可用于篩選潛在的抗抑郁藥物，并評估預(yù)期會影響抑郁相關(guān)行為的操作。測試時(shí)，用膠帶將老鼠的尾巴懸掛起來，使其無法逃脫或抓住附近的物體。整個(gè)測試期通常持續(xù)時(shí)間為6分鐘。懸尾實(shí)驗(yàn)是藥物發(fā)現(xiàn)中一種有價(jià)值的工具，可用于高通量篩選潛在的抗抑郁化合物。今天，我們將和大家一起了解懸尾實(shí)驗(yàn)測試過程中的細(xì)節(jié)，并特別強(qiáng)調(diào)可能發(fā)生的潛在問題以及如何避免這些問題。
實(shí)驗(yàn)材料
懸尾箱
懸尾實(shí)驗(yàn)箱通常有塑料制成，尺寸通常為高55cm*寬60cm*深11.5cm，為了防止動物相關(guān)觀察或互動，實(shí)驗(yàn)箱中間有擋板將小鼠隔開來，同時(shí)保證每只小鼠的隔間足夠?qū)挸?，小鼠不能觸碰到墻壁，每個(gè)隔間大小建議不低于這個(gè)尺寸：高55cm*寬15cm*深11.5cm。小鼠的鼻子與實(shí)驗(yàn)箱地板之間的大致距離建議為 20-25 cm。
每個(gè)隔間頂部裝有一個(gè)鋁制吊桿，用于懸掛小鼠的尾巴。需要注意，如果使用大型遠(yuǎn)交小鼠品系（例如 CD-1），則需要相應(yīng)增加尾部懸吊箱的各個(gè)隔室的大小。在每個(gè)隔間的底部，放置一個(gè)可拆卸移動的鋁制托盤，用于收集動物的糞便或尿液。
膠帶
膠帶是我們?nèi)粘Ｉ钪斜容^常見的工具，但是在懸尾測試中膠帶的選擇是至關(guān)重要的。膠帶應(yīng)牢固地粘在小鼠的尾部和吊桿上，并且強(qiáng)度足以承受被測小鼠的重量。同時(shí)，膠帶也不應(yīng)該太粘，因?yàn)槲覀儠诿?/span>個(gè)測試結(jié)束后取下動物，避免給動物帶來疼痛應(yīng)激。這里，我們建議選擇醫(yī)用膠帶，動物的尾巴皮質(zhì)比較接近于人的皮膚。另外，膠帶在每個(gè)小鼠尾巴粘貼的位置也要注意，盡量保持統(tǒng)一。
懸尾分析軟件
懸尾分析軟件的核心算法選擇也很重要，與曠場實(shí)驗(yàn)等測試不同，懸尾測試不應(yīng)該追蹤動物的質(zhì)心/重心。VisuTrack動物行為分析軟件（上海欣軟）通過考察小鼠四肢的真實(shí)運(yùn)動情況，實(shí)時(shí)分析小鼠搖擺不動（絕望狀態(tài)）、掙扎行為等指標(biāo)，自動存儲原始實(shí)驗(yàn)視頻。
白噪聲發(fā)生器（可選）
噪聲發(fā)生器可以掩蓋間歇性或者突發(fā)的環(huán)境聲音。特別推薦在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中使用噪音發(fā)生器，在這些環(huán)境中可以聽到可能會嚇到老鼠的突然響亮的噪音。在部分實(shí)驗(yàn)室中，環(huán)境噪聲水平（未激活白噪聲發(fā)生器）約為 60 dB。在進(jìn)行 TST 的位置激活白噪聲發(fā)生器的總聲級為 70-72 dB。但需要注意的是，這些數(shù)字僅作為示例提供，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)其*的環(huán)境和情況選擇合適的噪音水平。
清潔用品
每次測試結(jié)束后，使用消毒溶液，*擦拭懸掛盒。
亞克力透明套管（可選）
為了有效防止小鼠在測試過程中長時(shí)間攀爬，可以使用亞克力套管套在小鼠尾巴上，再進(jìn)行懸掛，具體方法可以參考以下視頻，效果棒棒噠！
實(shí)驗(yàn)步驟
1、調(diào)節(jié)好相機(jī)，盡可能靠近動物，獲得較高清晰度的視頻
2、開啟白噪聲發(fā)生器，掩蓋外部噪聲。避免高音量，并確保所有動物使用相同級別的白噪聲。
3、將待測小鼠帶入測試房間適應(yīng)，通常至少一小時(shí)。請注意，放置在同一個(gè)房間的其他動物可以感知嗅覺和超聲波信號。
4、將膠帶粘在老鼠的尾巴上。使用膠帶的標(biāo)記端并確保膠帶粘在尾部并重新貼在自身上。膠帶應(yīng)貼在尾巴的最末端，在膠帶外留下 2-3mm的尾巴。
5、以最短的時(shí)間，將膠帶或者老鼠尾巴固定到懸尾箱頂部的掛鉤上，因?yàn)檫^長時(shí)間的拖延會對小鼠有壓力。
6、使用VisuTrack軟件預(yù)先設(shè)置好的參數(shù)，實(shí)驗(yàn)采集分析6分鐘。
7、將小鼠送回它們的飼養(yǎng)籠后，從收集盤中丟棄糞便和尿液，并用消毒溶液擦拭裝置。
VisuTrack軟件分析小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)“謎團(tuán)"
1、小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)測試時(shí)長通常為6分鐘，與強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不同，小鼠在懸尾實(shí)驗(yàn)早期更容易表現(xiàn)出不動狀態(tài)。
2、測試中，只有小鼠的前肢活動，但后肢未動的情況，一律視為動物搖擺不動行為（絕望狀態(tài)）。
3、由于運(yùn)動慣性，小鼠的類似“鐘擺"活動也需要一律視為動物搖擺不動行為（絕望狀態(tài)）。
4、懸尾實(shí)驗(yàn)較強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)，沒有因浸入水中而導(dǎo)致體溫過低的風(fēng)險(xiǎn)，這2個(gè)實(shí)驗(yàn)在靈敏度和性能存在各種重要差異，并且一項(xiàng)測試的結(jié)果不一定會在另一項(xiàng)測試中復(fù)制。
實(shí)驗(yàn)差異，可參考這2篇文獻(xiàn)：
Cryan JF, Mombereau C, Vassout A. The tail suspension test as a model for assessing antidepressant activity: review of pharmacological and genetic studies in mice. Neurosci. Biobehav. Rev. 2005;29:571–625.
O'Leary OF, Cryan JF. In: Mood and Anxiety Related Phenotypes in Mice. Gould TD, editor. Vol. 42. Humana Press; 2009. pp. 119–137.
5、TST 不建議使用體重較大的大鼠，因?yàn)檫@些動物僅靠尾巴支撐體重可能會很痛苦。同樣，對于異常重的小鼠（例如用于模擬肥胖的小鼠）應(yīng)謹(jǐn)慎，在這些情況下，實(shí)驗(yàn)者應(yīng)尋找替代測試，例如強(qiáng)迫游泳測試。
6、預(yù)先用曠場實(shí)驗(yàn)測量小鼠的整體活動水平很有必要，可有效防止在懸尾實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生虛假結(jié)論。
