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SRM 2372a-人類DNA定量標(biāo)準(zhǔn)

SRM 2372a - Human DNA Quantitation Standard

        目的：本標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)（SRM）用于人類基因組脫氧核糖核酸（DNA）定量材料的值分配，主要用于定量聚合酶鏈反應(yīng)（qPCR）。
       描述：SRM 2372a的一個(gè)單元由三種在pH 8.0水性緩沖液中良好表征的人類基因組DNA材料組成。 這些成分來(lái)自人血沉棕黃層樣品，并標(biāo)記為A，B和C。成分A由來(lái)自單個(gè)雄性供體的基因組DNA組成。 組分B由來(lái)自單個(gè)雌性供體的基因組DNA組成。 組分C由基因組DNA的重量混合物（1個(gè)雄性供體和3個(gè)雌性供體）組成。 一個(gè)SRM單元由一個(gè)無(wú)菌的0.5 mL每種成分的小瓶組成，每個(gè)小瓶包含約55 µL DNA溶液。 這些小瓶均貼有標(biāo)簽，并用帶有顏色標(biāo)記的螺帽密封。

認(rèn)證值：表1中提供了認(rèn)證值。這些認(rèn)證值是基于8個(gè)染色體上的10個(gè)wei一靶標(biāo)的液滴數(shù)字聚合酶鏈反應(yīng)（ddPCR）分析計(jì)數(shù)，稀釋因子和液滴體積測(cè)量值而確定的。 NIST認(rèn)證值是NIST對(duì)所有已知或疑似偏差來(lái)源均已考慮在內(nèi)的值具有置信度的值。

表1. SRM 2372a（a）的數(shù)量和質(zhì)量濃度的認(rèn)證值副本號(hào)的值可通過(guò)計(jì)量學(xué)溯源到自然單位計(jì)數(shù)1和比率1以及單位制（SI）得出的體積單位。 DNA質(zhì)量濃度值可從計(jì)量學(xué)上追溯到自然單位計(jì)數(shù)和比率1以及SI衍生的質(zhì)量和體積單位。

（A）該值表示為x±U95％（x），其中x是認(rèn)證值，U95％（x）是認(rèn)證值的擴(kuò)展不確定度。相信分析物的真實(shí)值在x±U95％（x）的區(qū)間內(nèi)，置信度為95％。為了傳播這種不確定性，請(qǐng)將認(rèn)證值視為具有均值x和標(biāo)準(zhǔn)偏差U95％（x）/ 2的正態(tài)分布隨機(jī)變量。

（B）拷貝數(shù)濃度值（每納升人類單倍體基因組當(dāng)量（HHGE））基于八個(gè)染色體上十個(gè)目標(biāo)wei一的液滴數(shù)（ddPCR）分析，稀釋因子和液滴體積測(cè)量值。

（C）由濃度結(jié)果計(jì)算的每微升人類基因組DNA ng的質(zhì)量濃度值，是指HHGE中核苷酸堿基對(duì)（bp）的數(shù)量和鈉鹽的平均分子量構(gòu)成DNA聚合物的核苷酸單體。

表2。檢測(cè)特異性mtDNA/nDNA比值（a）這些值在計(jì)量學(xué)上可追溯到ddPCR測(cè)量方法和所使用的分析。

（a）值表示為x±U95％（x），其中x是估計(jì)值，U95％（x）是其擴(kuò)展的不確定性。該比率的真實(shí)值被認(rèn)為在x±U95％（x）的區(qū)間內(nèi)，置信度為95％。要傳播此不確定性，請(qǐng)將值視為具有均值x和標(biāo)準(zhǔn)偏差U95％（x）/ 2的正態(tài)分布隨機(jī)變量。

儲(chǔ)存和處理：在需要使用之前，應(yīng)將SRM 2372a避光保存在2°C至8°C之間。
在取出樣品等分試樣進(jìn)行分析之前，應(yīng)短暫混合組分小瓶并離心（不打開(kāi)小瓶蓋）。為使認(rèn)證值適用，應(yīng)在打開(kāi)樣品瓶后立即取出材料并立即進(jìn)行處理。認(rèn)證值不適用于加蓋的小瓶中的任何材料。該認(rèn)證僅適用于初次使用，如果以后再使用其余材料，則不能保證獲得相同的結(jié)果。

使用：對(duì)于qPCR測(cè)定，相對(duì)于認(rèn)證質(zhì)量濃度，為二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)DNA溶液分配值。使用一個(gè)或多個(gè)由SRM 2372a組分制備的稀釋系列，將測(cè)定校準(zhǔn)至SRM 2372a。對(duì)于非性別特異性qPCR分析，應(yīng)將所有三個(gè)組件用作校正劑，以闡明潛在的材料分析特異性相互作用。用戶應(yīng)記住，存在潛在的移液錯(cuò)誤。因此，在準(zhǔn)備校準(zhǔn)溶液時(shí)應(yīng)格外小心。

安全性：制備該產(chǎn)品時(shí)使用的每個(gè)供體單位均已通過(guò)FDA許可的測(cè)試，對(duì)人類免疫缺陷病毒（HIV-1 RNA和抗HIV 1/2），乙型肝炎（HBV DNA和HBsAg）呈陰性，丙型肝炎（HCV RNA和抗HCV），西尼羅河病毒（WNV RNA）和梅毒。此外，每個(gè)供體均根據(jù)FDA克氏錐蟲(chóng)（Chagas）的指南進(jìn)行了測(cè)試，發(fā)現(xiàn)為陰性/無(wú)反應(yīng)性。但是，沒(méi)有已知的測(cè)試方法可以*保證這種材料中沒(méi)有傳染原。因此，應(yīng)以生物安全等級(jí)1處理這種基于人類血液的產(chǎn)品。SRM 2372a組件和衍生的溶液應(yīng)按照當(dāng)?shù)?，州和?lián)邦法規(guī)進(jìn)行處置。

資料來(lái)源：該SRM是在NIST對(duì)人體進(jìn)行適當(dāng)研究確定后開(kāi)發(fā)的。