化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
A-Hc2233 | 2XT4 DNA Ligase | 20 次 |
產(chǎn)品概述：
DNA連接是一種常用的分子生物學(xué)實(shí)驗方法。T4 DNA 連接酶是使用最多的連接酶。2×T4 DNA Ligase Master Mix是一種高效的T4 DNA連接酶預(yù)混型試劑，包含了T4 DNA 連接酶、連接緩沖液及連接促進(jìn)劑等成分，只需要往DNA混合液中加入等體積的2×T4 DNA Ligase Master Mix即可完成連接反應(yīng)。
該產(chǎn)品在-20℃不會凍結(jié)，無需長時間的化凍過程，使用非常簡便。DNA片段在連接酶的作用下短時間便可發(fā)生高效連接。本產(chǎn)品應(yīng)用于粘性末端、平滑末端雙鏈DNA連接及TA克隆等。
保存條件：-20℃保存。
注意事項：
1.本試劑在-30℃以下溫度長時間保存時可能會產(chǎn)生凍結(jié)，但經(jīng)試驗證實(shí)，溶解后不影響連接活性，反復(fù)凍融多次不影響其活性。
2.T4 DNA ligase需要Mg2+為激活劑，因此螯合Mg2+的EDTA的存在會阻礙連接反應(yīng)。溶解于高濃度EDTA緩沖液的DNA需要用滅菌水或TE緩沖液進(jìn)行置換。
PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備？
試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；引物：PCR反應(yīng)的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實(shí)驗步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度，保證PCR反應(yīng)時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制；電泳槽：用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；核酸提取儀：從組織樣本中全自動提取核酸。 這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上，才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果。
PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗：
PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個循環(huán)組成，每個循環(huán)包括以下3個步驟：
一、變性：
利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前，通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離，僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘，接下來PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。
二、退火或稱接合,復(fù)性：
在DNA雙鏈分離后，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合。該步驟時間1-2分鐘。
三、延伸：
DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。
PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：
1、變性溫度和時間：
保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜ＷC整個PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s，再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長，可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。
2、復(fù)性溫度和時間:
PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高，產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低，產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。
3、延伸溫度和時間:
一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合，可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時間，可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長度而定，小于1kb, 1min足夠；大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間。這里需要注意，延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時間。
4、循環(huán)數(shù):
其他參數(shù)選定后，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后，PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值，實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%，因此不管模板濃度是多少，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多，非特異擴(kuò)增增加。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小腸結(jié)腸炎耶爾森菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 超敏生長激ELISA試劑盒 U S-GH免費(fèi)代測試劑 | 鴨腺病毒染料法熒光定量PCR試劑盒（暫停） |
狂犬病毒PCR檢測試劑盒（熒光PCR法） | 成纖維細(xì)胞生長因子17ELISA試劑盒 FGF17免費(fèi)代測試劑 | 產(chǎn)克雷伯菌PCR檢測試劑盒說明書 |
豬圓環(huán)病毒Ⅱ型PCR檢測試劑盒 | 晶狀體蛋白μELISA試劑盒 | 毛細(xì)線蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒 |
大豆內(nèi)源基因PCR檢測試劑盒 | 叢狀蛋白A4ELISA試劑盒 | 毛樣枝孢霉染料法熒光定量PCR試劑盒 |
馬勃探針法PCR鑒定試劑盒 | 蛋白O-巖藻糖基轉(zhuǎn)移1ELISA試劑盒 | 卡氏枝孢霉探針法熒光定量PCR試劑盒 |
禽呼腸孤病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 蛋白酪氨磷樣蛋白AELISA試劑盒 | 甲型流感病毒H3亞型(IAV-H3)核檢測試劑盒 |
病毒N8亞型(AIV-N8)核檢測試劑盒 | 電壓門控鉀通道抗體ELISA試劑盒 | 佩蘭探針法PCR鑒定試劑盒 |
馬傳染性貧血（EIAV）核檢測試劑盒 | 動力蛋白激活蛋白6ELISA試劑盒 | 六種腦炎腦膜炎病原體核檢測試劑盒(單純皰疹病毒 1 型、單純皰疹病毒 2 型、水痘帶狀皰疹病毒(人類皰疹病毒 3 型)、腸病毒、腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌)" |
麻風(fēng)桿菌(ML)核檢測試劑盒 | 多聚A特異性核糖核ELISA試劑盒 | 捻轉(zhuǎn)毛細(xì)線蟲PCR檢測試劑盒直銷 |
禽類肉瘤病毒PCR檢測試劑盒 | 二肽基肽7ELISA試劑盒 | 貓源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 |
蠟樣桿菌核檢測試劑盒 | 人鈣激活中性蛋白6(CAPN6)ELISA檢測試劑盒 | 諾卡菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒 |
炮姜染料法PCR鑒定試劑盒 | 人類似RIKENcDNA4933429F08基因試劑盒elisa | 瓜蔞探針法PCR鑒定試劑盒 |
鮰愛德華氏菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 2XT4 DNA Ligase人蛋白基因產(chǎn)物9.5(PGP 9.5)ELISA試劑盒 | 豬捷申病毒PCR檢測試劑盒 |
異源曼氏桿菌PCR檢測試劑盒 | 人TU3A蛋白(TU3A)ELISA Kit | 傳染性膿皰皮炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 |
禽肺病毒（APV）核檢測試劑盒 | 人玻連蛋白/體外粘連蛋白(VN/CD51+CD61)ELISA試劑盒 | 佩氏著色霉探針法熒光定量PCR試劑盒 |
化工儀器網(wǎng)