牛流行熱病毒（BEFV）熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒適用于檢測(cè)的牛全血等液體樣本等標(biāo)本中牛流行熱病毒 RNA，適用于牛流行熱病毒感染的輔助診斷。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。
本試劑盒用一對(duì)牛流行熱病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對(duì)牛流行熱病毒 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

牛流行熱病毒(BEFV)熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

商品名稱：牛流行熱病毒（BEFV）核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)

Name ：Diagnostic Kit for Bovine Ephemeral Fever Virus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

【包裝規(guī)格】48 份/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測(cè)的牛全血等液體樣本等標(biāo)本中牛流行熱病毒 RNA，適用于

牛流行熱病毒感染的輔助診斷。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒用一對(duì)牛流行熱病毒特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步

法熒光 RT-PCR 技術(shù)對(duì)牛流行熱病毒 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，用于臨床上對(duì)可疑

感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

0312禽白血病病毒(ALV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法)48T

0222新城疫病毒野生型(NDV-W)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法48T 新城疫病毒中強(qiáng)毒

0212新城疫病毒(NDV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法)48T

0914雞傷寒沙門氏菌(SPP.G)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法)48T

0912雞腸炎沙門氏菌(SPP.E)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法)48T

1312禽結(jié)合桿菌(ATB)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法)48T

1212鴨型乙型肝炎病毒(DHBV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法)48T

名 稱 規(guī) 格

酶液 50μl×1 管

BEFV 反應(yīng)液 1.0ml×1 管

BEFV 陽性質(zhì)控品 50μl ×1 管

陰性質(zhì)控品 250μl ×1 管

說明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 5 次，

有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

1112雞傳染性貧血病病毒(CIAV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法)48T

1014禽腺病毒(AADV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法)48T

1012雞減蛋綜合征病毒(EDSV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法)48T

ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ

Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】

抽取全血 5mL 至 EDTA-2Na 抗凝管。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但不能超過 6 個(gè)月，標(biāo)

本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

0712副雞嗜血桿菌(HPG)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法)48T

0612鴨瘟病毒(DPV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法)48T

0412雞毒支原體(MG)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR法)48T

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

按 RNA 提取試劑盒說明書進(jìn)行提取。

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒（離心柱提取

法），請(qǐng)按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

對(duì)照+1 管陽性對(duì)照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑 BEFV 反應(yīng)液 酶液

用量 20μl 1μl

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl，分別加入相應(yīng)的反

應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul；熒光通道選擇：

檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請(qǐng)勿

選擇 ROX 參比熒光。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時(shí)間 收集熒光信號(hào)

1 1cycle 42℃ 20min 否

2 1 cycle 95℃ 10min 否

3 40 cycle

94℃ 15sec 否

55℃ 30sec 是

5. 結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲

線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15

范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value

值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線；

可疑：檢測(cè)通道 35.0<Ct 值≤37，建議重復(fù)檢測(cè)，如果檢測(cè)通道仍為 35.0<Ct

值≤37，且曲線有明顯的增長(zhǎng)曲線，判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。

7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，且 Ct 值≤32；

以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

陰陽性參考品符合率：5 份陽性參考品符合率為 100％；10 份陰性參考品符合率

為 100％。

低檢測(cè)限：5.0×102copies/ml。

精密度：批內(nèi)、批間精密度檢測(cè) Ct 值的變異系數(shù)（CV）均小于等于 3%。

 

牛流行熱病毒(BEFV)熒光PCR核酸檢測(cè)試劑盒相關(guān)產(chǎn)品：

1112鴨病毒性肝炎病毒1型(DHV-I)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PC48T

1012禽肺病毒(APV)核酸檢測(cè)試劑盒核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR48T

0912雞傳染性法氏囊炎病毒(IBDV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR48T

0712禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增殖病病毒(REV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PC48T

0412禽傳染性支氣管炎病毒(AIBV)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR48T

0322禽白血病病毒J型(ALV-J)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法48T