漢坦病毒通用型（HTV-U）熒光PCR檢測試劑盒適用于檢測的鼠或疑似感染病人的血液等標(biāo)本中漢坦病毒通用型RNA，適用于漢坦病毒通用型感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。
本試劑盒用一對(duì)漢坦病毒通用型特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對(duì)漢坦病毒通用型 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

漢坦病毒通用型（HTV-U）熒光PCR檢測試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

商品名稱：漢坦病毒通用型（HTV-U）核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)

Name ：Diagnostic Kit for Hantavirus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

【包裝規(guī)格】48 份/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測的鼠或疑似感染病人的血液等標(biāo)本中漢坦病毒通用型RNA，適用于漢坦病毒通用型感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒用一對(duì)漢坦病毒通用型特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對(duì)漢坦病毒通用型 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【試劑組成】

說明：不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

【適用儀器】

ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ

Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。

【標(biāo)本采集】

抽取鼠或疑似感染病人的血液 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個(gè)月，標(biāo)

本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

按 RNA 提取試劑盒說明書進(jìn)行提取。

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒（離心柱提取

法），請(qǐng)按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

對(duì)照+1 管陽性對(duì)照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑 HTV-U 反應(yīng)液 酶液

用量 20μl 1μl

1121-48廣州管圓線蟲(AC)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

0321-48腸道病毒EV71型(EV-71)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

0421-48 saffold心病毒(SAFV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

0621-48柯薩奇病毒CA16型(CAV-16)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

0721-48呼吸道合胞病毒A 型（RSV-A）核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

0821-48呼吸道合胞病毒B 型（RSV-B）核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

1021-48登革熱病毒2型(DFV-II)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

1121-48登革熱病毒3型(DFV-III)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

1521-48新疆出血熱病毒(XHFV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

1621-48寨卡（zika）病毒核酸檢測試劑盒（熒光-PCR法）

1721-48黃熱病毒（YFV）核酸檢測試劑盒（熒光-PCR法）

1821-48布尼亞病毒（BV）核酸檢測試劑盒（熒光-PCR法）

1921-48登革熱病毒4型(DFV-IV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

2021-48登革熱病毒1型(DFV-I)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

1711-48貂源性成分（Martes）核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

1811-48狐貍源性成分（Vulpes）核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

1911-48鯊魚源性成分（Shark）核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl，分別加入相應(yīng)的反

應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul；熒光通道選擇：

檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請(qǐng)勿

選擇 ROX 參比熒光。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲

線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15

范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value

值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；

可疑：檢測通道 35.0<Ct 值≤37，建議重復(fù)檢測，如果檢測通道仍為 35.0<Ct

值≤37，且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。

7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32；

以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

漢坦病毒通用型（HTV-U）熒光PCR檢測試劑盒關(guān)聯(lián)產(chǎn)品：

4121-48肉毒桿菌E型（CB-E）核酸檢測試劑盒（熒光-PCR法）

4221-48肉毒桿菌F型（CB-F）核酸檢測試劑盒（熒光-PCR法）

4321-48表皮葡萄球菌(SE)核酸檢測試劑盒（熒光-PCR法）

4421-48糞腸球菌（EF）核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

4521-48惡性瘧原蟲（PF）核酸檢測試劑盒（熒光-PCR法）

0321-48人類白細(xì)胞抗原（HLA-B27）核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

0521-48解脲支原體(UU)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

0821-48人皰疹病毒(HHV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

0921-48單純皰疹病毒(HSV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)

1021-48異尖線蟲(Ani)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)