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          登革熱病毒通用(DFV-U)熒光PCR檢測試劑盒

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          • 登革熱病毒通用(DFV-U)熒光PCR檢測試劑盒
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            上海市

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          更新時間:2023/03/08 19:57:12瀏覽次數(shù):1747

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          產(chǎn)品簡介

          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 48T
          貨號 XK-PCR-1242 主要用途 科學(xué)研究
          登革熱病毒通用(DFV-U)熒光PCR檢測試劑盒適用于檢測的疑似感染病人的靜脈血等標(biāo)本中登革熱病毒通用型RNA,適用于登革熱病毒通用型感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。
          本試劑盒用一對登革熱病毒通用型特異性引物,結(jié)合一條特異性熒光探針,用一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對登革熱病毒通用型 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

          詳細(xì)介紹

          登革熱病毒通用(DFV-U)熒光PCR檢測試劑盒說明書

          【產(chǎn)品名稱】

          商品名稱:登革熱病毒通用型(DFV-U)核酸檢測試劑盒(RT-PCR 熒光探針法)

          Name :Diagnostic Kit for Dengue Virus RNA (RT-PCR Fluorescence Probing)

          【包裝規(guī)格】48 份/盒

          【預(yù)期用途】

          本試劑盒適用于檢測的疑似感染病人的靜脈血等標(biāo)本中登革熱病毒通用型

          RNA,適用于登革熱病毒通用型感染的輔助診斷。其檢測結(jié)果僅供參考。

          【檢驗原理】

          本試劑盒用一對登革熱病毒通用型特異性引物,結(jié)合一條特異性熒光探針,用

          一步法熒光 RT-PCR 技術(shù)對登革熱病毒通用型 RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測,用于臨床

          上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

          【試劑組成】

          名 稱 規(guī) 格

          酶液 50μl×1 管

          DFV-U 反應(yīng)液 1.0ml×1 管

          DFV-U 陽性質(zhì)控品 50μl ×1 管

          陰性質(zhì)控品 250μl ×1 管

          說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

          【儲存條件及有效期】

          -20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 5 次,

          有效期 12 個月。

          【適用儀器】

          ABI 7300、7500、ABI stepone / stepone plus 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ

          Opticon2 等其他熒光定量 PCR 檢測儀。

          【標(biāo)本采集】

          疑似感染病人的靜脈血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管。

          【保存和運(yùn)輸】

          上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標(biāo)

          本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

          【使用方法】

          1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

          1.1樣本前處理

          2000rpm 離心 5min,吸取上層血清轉(zhuǎn)入 1.5mL 滅菌離心管中。

          1.2RNA 提取

          推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒(離心柱提取

          法),請按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

          2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

          根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

          對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:

          試劑 DFV-U 反應(yīng)液 酶液

          用量 20μl 1μl

          3. 加樣(樣本處理區(qū))

          將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μl,分別加入相應(yīng)的反

          應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

          4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

          4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

          4.2設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25ul;熒光通道選擇:

          檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請勿

          選擇 ROX 參比熒光。

          4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

          步驟 循環(huán)數(shù) 溫度 時間 收集熒光信號

          1 1cycle 42℃ 20min 否

          2 1 cycle 95℃ 10min 否

          3 40 cycle

          94℃ 15sec 否

          55℃ 30sec 是

          5. 結(jié)果分析判定

          5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

          設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機(jī)器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲

          線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15

          范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value

          值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。

          5.2結(jié)果判斷

          陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線;

          可疑:檢測通道 35.0<Ct 值≤37,建議重復(fù)檢測,如果檢測通道仍為 35.0<Ct

          值≤37,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;

          陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>37 或無 Ct 值。

          6. 檢測方法的局限性

          Ø 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);

          Ø 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

          Ø 陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會導(dǎo)致假陽性結(jié)果;

          Ø 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

          Ø 不同的提取方法存在提取效率差異,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

          Ø 試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或

          定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果;

          Ø 本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

          7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

          陰性質(zhì)控品:無明顯擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示;

          陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32;

          以上條件應(yīng)同時滿足,否則實驗視為無效。

          8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

          陰陽性參考品符合率:5 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合率

          為 100%。

          低檢測限:5.0×102copies/ml。

          精密度:批內(nèi)、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)(CV)均小于等于 3%。

          【注意事項】

          Ø 所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;

          Ø 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,*混勻并短暫離心;

          Ø 反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

          Ø 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

          Ø 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)工作服;

          Ø 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

          Ø 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

          Ø 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全

          通則》進(jìn)行處理。

          登革熱病毒通用(DFV-U)熒光PCR檢測試劑盒相關(guān)產(chǎn)品:

          0121甲型流感病毒H1亞型(IAV-H1)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
          0111甲型流感病毒(IAV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
          1601流感嗜血桿菌(Hi)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
          1501麻風(fēng)桿菌(ML)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
          0111呼吸道腺病(ADV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)48T
          0201肺炎支原體(MP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)48T
          0301肺炎衣原體(CP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)48T
          0401結(jié)核桿菌(TB)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)48T
          0501腦膜炎奈瑟菌通用型(NM-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探48T

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