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          艱難梭菌(TCD-B)熒光探針PCR核酸檢測試劑盒

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          • 艱難梭菌(TCD-B)熒光探針PCR核酸檢測試劑盒
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            上海市

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          更新時間:2023/03/08 19:59:03瀏覽次數(shù):677

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          產(chǎn)品簡介

          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 48T
          貨號 XK-PCR-1050 主要用途 科學(xué)研究
          艱難梭菌(TCD-B)熒光探針PCR核酸檢測試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光PCR技術(shù),設(shè)計一對艱難梭菌特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR技術(shù)對艱難梭菌的核酸進(jìn)行體外擴增檢測, 用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。在反應(yīng)體系中含基因組模板的情況下,反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應(yīng)通道的信號強度進(jìn)行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性、定量分析。

          詳細(xì)介紹

          艱難梭菌(TCD-B)熒光探針PCR核酸檢測試劑盒說明書

          【產(chǎn)品名稱】

          通用名稱:艱難梭菌(TCD-B)核酸擴增檢測試劑盒(PCR 熒光探針法)

          Name :Clostridium difficile (TCD-B) nucleic acid amplification detection kit (PCR fluorescence probe method)

          【包裝規(guī)格】48T/盒

          【預(yù)期用途】

          本試劑盒適用于檢測水樣糞便等樣本中的艱難梭菌,用于艱難梭菌感染的輔助診斷,其檢測結(jié)果僅供參考。

          【檢驗原理】

          本試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術(shù),設(shè)計一對艱難梭菌特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR 技術(shù)對艱難梭菌的核酸進(jìn)行體外擴增檢測, 用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

          【試劑組成】

          0301轉(zhuǎn)基因植物NPTII基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
          0291轉(zhuǎn)基因植物PAT基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
          0281轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE601核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
          0271轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
          0251轉(zhuǎn)基因水稻TT51-1(BT63)基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
          0241轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

          說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

          2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑盒(離心

          柱提取法),請嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

          2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

          根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR 反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1 管陰性

          對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:

          3. 加樣(樣本處理區(qū))

          將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)

          管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

          4. PCR 擴增(核酸擴增區(qū))

          4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

          4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;

          熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)

          NONE,請勿選擇 ROX 參比熒光。

          5. 結(jié)果分析判定

          【注意事項】

          1)所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;

          2)試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,*混勻并短暫離心;

          3)反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

          4)反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

          5)使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)工作服;

          6)樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

          7)實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

          8)試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全 通則》進(jìn)行處理。

          5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定

          設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體

          傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop

          值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰

          性對照),重新分析結(jié)果。

          5.2 結(jié)果判斷

          陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。

          可疑:檢測通道 Ct 值>35.0,且出現(xiàn)典型擴增曲線的樣本建議重復(fù)試驗,重復(fù)試驗

          結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴增曲線者為陽性,否則為陰性。

          陰性:樣本檢測結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴增曲線。

          6. 檢測方法的局限性

          1)樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān);

          2)樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

          3)陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,會導(dǎo)致假陽性結(jié)果;

          4)病原體在流行過程中基因突變、重組,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

          5)不同的提取方法存在提取效率差異,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

          6)試劑運輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果;

          7)本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

          7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

          陰性質(zhì)控品:無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示;

          陽性質(zhì)控品:擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32; 以

          上條件應(yīng)同時滿足,否則實驗視為無效。

          8. 產(chǎn)品性能指標(biāo)

          陰陽性參考品符合率:5 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合率為100%。

          低檢測限:1.0×10 3copies/mL。

          精密度:批內(nèi)、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)(CV)均小于等于 3%。

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          0321轉(zhuǎn)基因植物Cry1A(c)基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
          0311轉(zhuǎn)基因植物Bar基因核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

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