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你需要了解的的色譜！
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液相色譜是一類(lèi)分離與分析，是以液體作為流動(dòng)相，固定相可以有多種形式，如紙、薄板和填充床等。在色譜發(fā)展的過(guò)程中．為了區(qū)分多種方法，根據(jù)固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名，如紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。
液相色譜有很多種類(lèi)，其中正相色譜是先被發(fā)明出來(lái)的，它的特點(diǎn)是色譜柱里固定相極性大于流動(dòng)相的極性。
在正相色譜中，流動(dòng)相是弱極性的，比如正己烷，石油醚等。
而固定相是有極性的，比如硅羥基的硅膠。
這些極性的硅羥基就像賽道兩邊的小手，和進(jìn)入色譜柱的化合物發(fā)生相互作用。根據(jù)相似相溶原理，極性大的化合物和小手的作用強(qiáng)，出峰就會(huì)慢一些。極性弱的化合物與硅羥基彼此不感興趣，出峰就會(huì)快一些。
在化學(xué)家掌握了硅膠的化學(xué)鍵合之后，反相色譜得到了很大的發(fā)展。正如其名，反相色譜就是和正相色譜反過(guò)來(lái)。
它的流動(dòng)相是強(qiáng)極性的，比如甲醇/水。
而固定相是弱極性的，比如十八烷基鍵合硅膠柱，也叫C18柱，就是把硅膠上原本的硅羥基變成了一條碳十八的長(zhǎng)鏈。
這樣一來(lái)硅膠表面就從強(qiáng)極性變成了弱極性。
雖然正相色譜是先發(fā)明的，但使用并不普遍。現(xiàn)在，反相色譜的應(yīng)用占到了液相應(yīng)用的80以上。這是為什么呢？
一來(lái)，反相色譜的流動(dòng)相不需要烴類(lèi)、LV仿這些危險(xiǎn)的有機(jī)溶劑，使用起來(lái)更加簡(jiǎn)單和全。
二來(lái)，液相和氣相是互相補(bǔ)充。極性弱，沸點(diǎn)低的化合物優(yōu)先用氣相分析。而極性強(qiáng)的化合物由于分子間作用力強(qiáng)，往往沸點(diǎn)不低，不適合用氣相分析，適合用反相液相色譜分析。
另外，反相色譜的流動(dòng)相有多的參數(shù)選擇，比如pH、緩沖鹽的種類(lèi)和濃度等，能好地調(diào)整分離，而正相色譜可調(diào)整的流動(dòng)相參數(shù)是有限。
此外，還有一些化合物，既不適合用正相分析，也不適合用反相分析，比如糖類(lèi)。
因?yàn)樘穷?lèi)有很多羥基，極性很強(qiáng)。
若用反相分析，糖和C18沒(méi)有相互作用，出峰太快，無(wú)法分離。若用正相分析，糖類(lèi)又不能溶解在正己烷這種非極性的流動(dòng)相里，也無(wú)法分離。這種情況，我們可以嘗試使用親水作用色譜，HILIC模式。近幾年關(guān)于LCMS的HILIC應(yīng)用研究熱門(mén)，它使用類(lèi)似于正相的色譜柱，比如硅膠，和傳統(tǒng)反相的流動(dòng)相，比如乙腈/水。
這樣的組合即能夠溶解樣品，又能夠保留樣品，終使樣品得到好的分離。
如果化合物的極性強(qiáng)，一言不合就電離。
還可以選擇離子對(duì)色譜，或者離子交換色譜，來(lái)增離子和固定相的相互作用，使不同的化合物得到分離。
離子交換色譜
離子交換色譜通常用離子交換樹(shù)脂作為固定相。一般是樣品離子與固定相離子進(jìn)行可逆交換，由于各組分離子的交換能力不同，從而達(dá)到色譜的分離。
離子交換色譜法是新發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)現(xiàn)代分析，已大范圍用于氨基酸、蛋白質(zhì)的分析，也適合于某些無(wú)機(jī)離子(N03-、SO42-、Cl-等無(wú)機(jī)陰離子和Na+、Ca2+、Mg2+、K+等無(wú)機(jī)陽(yáng)離子)的分離和分析，具有重要的作用。
凝膠色譜
不管是正相、反相還是離子交換色譜，化合物出峰的情況都是和極性相關(guān)的，而凝膠色譜的出峰卻只和化合物的大小有關(guān)，所以也叫體積排阻色譜。
當(dāng)樣品流經(jīng)凝膠色譜柱時(shí)，直徑較大的化合物，不易進(jìn)入凝膠顆粒的微孔中，所以很快出峰。而直徑較小的化合物會(huì)進(jìn)入凝膠顆粒的微孔中，并不斷的進(jìn)出和擴(kuò)散，因此，較晚出峰。
目前，凝膠色譜法既適用于水溶液的體系，又適用于有機(jī)溶劑的體系。當(dāng)所用的洗脫劑為水溶液時(shí)，稱(chēng)為凝膠過(guò)濾色譜，其在生物界的應(yīng)用比較多；采用有機(jī)溶劑為洗脫劑時(shí)，稱(chēng)為凝膠滲透色譜，在高分子領(lǐng)域應(yīng)用較多。