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          技術(shù)文章

          膠原酶的使用和配置

          閱讀:1247          發(fā)布時間:2022-4-28

          配置

          膠原酶溶液同胰蛋白酶一樣配制、消毒滅菌和儲藏。
          注意:
          因為Ⅰ型膠原酶分子顆粒比胰酶大,不容易過濾,因此可以用蔡式濾器過濾除菌。
          鈣、鎂離子和血清成分不會影響膠原酶的消化作用,因而可用BSS(如D-hanks或者PBS)或含血清的培養(yǎng)液配制。

          使用

          1.將漂洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm3左右小塊
          2.將組織塊放入離心管(三角燒瓶)中加入30~50倍體積的膠原酶溶液,旋緊蓋子(密封燒瓶)。
          3.將燒瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱內(nèi),每隔3min振搖一次,如能放在37℃的恒溫震蕩水浴箱中則更好。
          消化時間與組織的類別有關(guān),對于某些腫瘤組織或其他較致密結(jié)締組織,消化時間4~48h,對于容易消化的組織可以采用37℃震蕩消化15~45min,也可以根據(jù)具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀,一經(jīng)搖動即成細胞團或單個細胞,可以認(rèn)為已消化充分。上皮組織經(jīng)膠原酶消化后,由于上皮細胞對此酶有耐受性,可能仍有一些細胞團未*分散,但成團的上皮細胞比分散的單個上皮細胞更易生長,因此,如無特殊需要可以不必再進一步處理。
          4.收集消化液(有時含個別組織塊及沒有充分消化的組織碎屑則需用100目不銹鋼網(wǎng)過濾),離心1000r/min,5min,去除上清,用Hanks液或者無血清培養(yǎng)液離心漂洗1~2次,去除上清,加培養(yǎng)液制成細胞懸液,接種培養(yǎng)瓶。


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