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液體培養(yǎng)基的配置方法
閱讀:2439 發(fā)布時間:2022-7-18液體培養(yǎng)基( liquid culture medium),固體培養(yǎng)基的對應(yīng)詞,是微生物或動植物細(xì)胞的液狀培養(yǎng)基。它具有進(jìn)行通氣培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)的優(yōu)點。在靜止的條件下,在菌體或培養(yǎng)細(xì)胞的周圍,形成透過養(yǎng)分的壁障,養(yǎng)分的攝入受到阻礙。由于在通氣或在振蕩的條件下,可消除這種阻礙以及增加供氧量,所以有利于細(xì)胞生長,提高生產(chǎn)量。
培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料,一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。有的培養(yǎng)基還含有抗菌素和色素,用于單種微生物培養(yǎng)和鑒定。
液體培養(yǎng)基是培養(yǎng)基物理分類一種,是相對固體培養(yǎng)基而言的,是微生物或動植物細(xì)胞的液狀培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中的培養(yǎng)稱為液中培養(yǎng)、液體培養(yǎng)或液內(nèi)培養(yǎng)。
培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。一般培養(yǎng)基在受熱、吸潮后,易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì),因此一般培養(yǎng)基必須防潮、避光、陰涼處保存。對一些需嚴(yán)格滅菌的培養(yǎng)基(如組織培養(yǎng)基),較長時間的貯存,必須放在3~6℃的冰箱內(nèi)。
配置方法
1.配料
配方換算→在容器中加入少量水〔蒸餾水,自然水〕→按照配方稱取各種藥品〔依次加入〕→加足所需水量《一藥一勺,取藥后立即蓋上瓶蓋》。
2.溶解
淀粉溶解:少量冷水調(diào)成糊狀
加熱溶解,特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基,一定要煮沸,瓊脂的熔解溫度95~97℃ ,且需要邊
加熱邊攪拌以防止燒焦。
3.調(diào)PH
用1N的鹽酸或的1N NaOH把培養(yǎng)基調(diào)節(jié)到所要求的值。
4.過濾
濾紙或棉花進(jìn)行過濾。
5.分裝
一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。
(1)三角瓶
若作靜置培養(yǎng),則100 ml培養(yǎng)基/250 ml的三角瓶,最多不能超過150 ml培養(yǎng)基/250 ml的
三角瓶,否則滅菌時培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養(yǎng),則15~20 ml培養(yǎng)基/250
ml的三角瓶,保證通氣良好。
(2)試管分裝
液體培養(yǎng)基一般裝4~5 ml,約試管的1/4高度;
固體斜面培養(yǎng)基一般裝3~4 ml,約試管的1/5高度。
6.包扎
分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時水份進(jìn)入把棉塞弄濕。
7.滅菌
按配方上要求的溫度、壓力進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養(yǎng)成分會被破壞,培養(yǎng)
基中的糖、氨基酸會使培養(yǎng)基的顏色變深。
8.擺斜面
滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,使其凝固成為一個斜面,約占試管長度的1/2。
9.貯存
培養(yǎng)基在30℃下放置一天,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用