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流式細(xì)胞儀的臨床應(yīng)用:

1. 流式細(xì)胞術(shù)在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用：流式細(xì)胞術(shù)可以檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖周期、檢測(cè)腫瘤細(xì)胞表面標(biāo)記、癌基因表達(dá)產(chǎn)物、進(jìn)行多藥耐藥性分析、檢測(cè)凋亡;

2. 流式細(xì)胞術(shù)在血液學(xué)中的應(yīng)用：檢測(cè)白血病和淋巴瘤細(xì)胞、活化血小板、造血干細(xì)胞(CD34+)計(jì)數(shù)、白血病與淋巴瘤的免疫分型、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè);

3. 流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)中的應(yīng)用：可以進(jìn)行淋巴細(xì)胞及其亞群分析、淋巴細(xì)胞免疫分型、檢測(cè)細(xì)胞因子。異常結(jié)果：有資料表示對(duì)71例胸腔積液做流式細(xì)胞DNA分析，結(jié)果顯示，對(duì)惡性胸腔積液診斷的敏感性為52%，特異性達(dá)100%。若與常規(guī)檢查聯(lián)合應(yīng)用，則可使診斷的敏感性達(dá)到94%。癌性胸水細(xì)胞的DNA分析可見異倍體和S期、G2/M期細(xì)胞比例增高。

 

流式細(xì)胞DNA分析檢查過程：

流式細(xì)胞儀并非是自動(dòng)化的儀器，準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果還需要準(zhǔn)確的人工技術(shù)配合，所以標(biāo)本制備需要規(guī)范，儀器本身亦需要質(zhì)量控制。

(一)流式細(xì)胞術(shù)免疫學(xué)檢測(cè)的影響因素和質(zhì)量控制

流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)中有著廣泛的應(yīng)用，其免疫熒光染色的標(biāo)本制備非常重要，常常由于標(biāo)本制備過程中出現(xiàn)人為非特異性熒光干擾(尤其在間接免疫熒光染色中)或細(xì)胞濃度低等影響檢測(cè)結(jié)果。解決這些影響因素的方法如下：

(1)確保標(biāo)本上機(jī)檢測(cè)前的濃度為1X106細(xì)胞/ml，細(xì)胞濃度過低直接影響檢測(cè)結(jié)果。

(2)使用蛋白封閉劑，封閉非特異結(jié)合位點(diǎn)，尤其在間接免疫熒光標(biāo)記時(shí)需要。常用的蛋白封閉劑為0.5%牛血清白蛋白和1%胎牛血清。

(3)熒光抗體染色后充分洗滌，注意混勻和離心速度，減少重疊細(xì)胞和細(xì)胞碎片。

(4)設(shè)置對(duì)照樣品，采用與抗體來源同型匹配的無關(guān)對(duì)照和熒光抗體的本底對(duì)照。

(5)判定結(jié)果時(shí)，應(yīng)注意減去本底熒光，為使免疫熒光的定量分析更精確，應(yīng)用計(jì)算機(jī)程序軟件，用擬合曲線方法從實(shí)驗(yàn)組的曲線峰值中減去對(duì)照組的曲線峰值，可以得到更準(zhǔn)確的免疫熒光定量結(jié)果。

(6)注意染色后避光，保證細(xì)胞免疫熒光的穩(wěn)定。

(二)DNA倍體分析的質(zhì)量控制仍沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，各文獻(xiàn)報(bào)道的實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異較大，1993年10月美國癌癥研究組織制定了FCMDNA測(cè)定的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，我們根據(jù)這些標(biāo)準(zhǔn)并結(jié)合國內(nèi)有經(jīng)驗(yàn)的專家多年的實(shí)踐，對(duì)FCM的DNA分析技術(shù)的質(zhì)控和注意事項(xiàng)進(jìn)行說明。

(1)手術(shù)切除的新鮮標(biāo)本或活檢針吸標(biāo)本取材時(shí)，要避免出血壞死組織。

(2)標(biāo)本采集后要及時(shí)固定或深低溫保存，以免組織發(fā)生自溶，DNA降解，而造成測(cè)試結(jié)果的誤差。

(3)固定劑要采用對(duì)組織細(xì)胞穿透性強(qiáng)的濃度，70%的乙醇固定效果較好。

(4)單細(xì)胞懸液制備過程中，注意將待測(cè)細(xì)胞成分分離出來，減少其他成分的干擾，并注意不要損傷該群細(xì)胞。

(5)細(xì)胞樣品的采集要保證足夠的細(xì)胞濃度，即1X106細(xì)胞/ml，雜質(zhì)、碎片、團(tuán)塊和重疊細(xì)胞應(yīng)8%，與腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)性有關(guān)。另外，DNA倍體分析時(shí)，同源組織的不同個(gè)體會(huì)出現(xiàn)10%的漂移。

(6)DNA倍體標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量控制，采用相同個(gè)體同源正常組織、同樣固定方法、相同的樣品處理方法、相同的染色方法、同步染色、同樣的儀器檢測(cè)條件、正常的二倍體組織作為內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)。