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黃曲霉毒素的檢測(cè)方法
閱讀：1355 發(fā)布時(shí)間：2022-12-9AF的檢測(cè)方法從最初以薄層層析法為主，發(fā)展到高效液相色譜法、微柱法、酶聯(lián)免疫吸附法等多種方法普遍應(yīng)用，其進(jìn)展與新的化學(xué)檢測(cè)手段和新儀器的出現(xiàn)密不可分。這些新方法、新手段的快速應(yīng)用，為黃曲霉毒素的檢測(cè)提供了更廣泛的選擇余地，適應(yīng)了不同的檢測(cè)目的和要求。
薄層層析法
薄層層析法（TLC）是測(cè)定AF的經(jīng)典方法，其原理是將樣品經(jīng)過(guò)提取、柱層析、洗脫、濃縮、薄層分離后，在波長(zhǎng)365nm紫外光下產(chǎn)生藍(lán)紫色或黃綠色熒光，并根據(jù)其在薄層上顯示的最/低檢出量來(lái)確定其含量。
高效液相色譜法
HPLC具有高分辨率，分析時(shí)間較短等優(yōu)點(diǎn)。它的原理是樣品溶液中欲分離的幾種化合物在流動(dòng)相和固定相之間有不同的分配量，從而達(dá)到分離的目的。AF經(jīng)柱后電化學(xué)衍生化后，能發(fā)射特征性熒光，被熒光檢測(cè)器捕獲后而得到檢測(cè)，最后經(jīng)化學(xué)工作站處理數(shù)據(jù)。這一檢測(cè)方法，將化學(xué)分析試驗(yàn)與領(lǐng)/先的計(jì)算機(jī)技術(shù)結(jié)合，使自動(dòng)化程度得到極大的提高，在試驗(yàn)空間、人力和儀器都保持不變的情況下，能檢測(cè)更多的樣品。HPLC是近幾年發(fā)展起來(lái)的檢測(cè)AFB1的方法，主要是用熒光檢測(cè)器檢測(cè)。該法快速而準(zhǔn)確，但需要昂貴的儀器設(shè)備，未能廣泛使用。
微柱法
微柱法測(cè)定AF，是利用微柱管內(nèi)的硅鎂型吸附劑吸附AF并在365nm紫外光下顯示熒光，其強(qiáng)度與一定濃度的AF含量成正比關(guān)系，由此可簡(jiǎn)略定量AF。
酶聯(lián)免疫吸附法
酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是抗原（或抗體）吸附劑和用酶標(biāo)記的抗體（或抗原）與標(biāo)本中的待測(cè)物（抗原和抗體）起特異的免疫學(xué)反應(yīng)，用測(cè)定酶活力的方法來(lái)增加測(cè)定的敏感度，是一種定性或半定量的方法。大致采用兩種方法檢測(cè)AF：一種是用雙抗體夾心法；另一種是用競(jìng)爭(zhēng)法。免疫吸附法測(cè)定的試劑盒及配套儀器、方法被列入國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T5009 22-1996第二法）。
關(guān)于運(yùn)用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)AFB1的檢測(cè)報(bào)道也較多，目前國(guó)外已有較成熟的檢測(cè)食品及飼料中AFB1等真菌毒素的ELISA試劑盒出售，我國(guó)自20世紀(jì)90年代以來(lái)也有一些以ELISA檢測(cè)食品及飼料中AFB1的研究報(bào)道。
其他方法
（1）溴化熒光分光光度法（SFB）
樣品經(jīng)甲醇-水混合溶劑提取后，部分提取液通過(guò)固相分離進(jìn)行柱前處理，500μL純化的提取液用溴試劑衍生化后，用熒光檢測(cè)計(jì)中檢測(cè)，樣品熒光吸收度與硫酸喹啉液的吸收度比較可直接換算成AF的總含量。該法已通過(guò)AOAC和美國(guó)農(nóng)業(yè)部聯(lián)邦谷物檢測(cè)中心的認(rèn)證。
（2）超光譜方法（HS）
超光譜法是基于反射能基礎(chǔ)上的一種非侵入無(wú)破壞的映像技術(shù)，用于農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)中，能夠快速地提供該產(chǎn)品的有關(guān)化學(xué)和其他方面的內(nèi)部細(xì)節(jié)。另?yè)?jù)研究報(bào)道，培訓(xùn)黃蜂可用于AF檢測(cè)。由于AF主要是由黃曲霉產(chǎn)生的，寄生黃蜂通過(guò)培訓(xùn)能把黃曲霉的氣味和糖水聯(lián)系起來(lái)，并對(duì)這些氣味產(chǎn)生有區(qū)別的行為反應(yīng)，借此來(lái)識(shí)別目標(biāo)氣味的存在。這種培訓(xùn)反應(yīng)正在應(yīng)用于儲(chǔ)藏玉米、花生的AF監(jiān)控和檢測(cè)實(shí)踐當(dāng)中，目前還未給出有關(guān)的結(jié)果評(píng)定。
各方法對(duì)比
薄層層析法對(duì)樣品處理繁瑣，實(shí)驗(yàn)過(guò)程復(fù)雜，所需時(shí)間多，易受雜質(zhì)干擾，較適合于對(duì)AF的定性檢測(cè)，是研究AF初期所使用的主要方法。今后，雖然薄層層析法在不斷地改進(jìn)，并在一般實(shí)驗(yàn)室均可完成操作，但由于它復(fù)雜的前處理過(guò)程致使在應(yīng)用中仍然會(huì)受到一定程度的限制。
高效液相色譜法測(cè)定AF，技術(shù)水平要求較高，目前采用這種方法檢測(cè)AF較多，但具體一次實(shí)驗(yàn)所使用的化學(xué)藥劑和處理途徑差別很大，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精度造成影響，這種方法還應(yīng)在實(shí)踐中進(jìn)一步改進(jìn)。但總體上說(shuō)高效液相色譜法操作較為簡(jiǎn)便，同時(shí)可檢測(cè)多個(gè)AF種類，適于大批量樣品的分析。將免疫親和柱與高效液相色譜法結(jié)合應(yīng)用，是目前采用較多的一種方法，今后將被廣泛應(yīng)用。
微柱法測(cè)定AF，主要是用來(lái)檢驗(yàn)AF的存在與否以及快速篩選出超標(biāo)樣品，而要對(duì)AF種類進(jìn)行區(qū)分定量檢驗(yàn)，則需要對(duì)不同AF組分進(jìn)行分離，再利用其他方法檢測(cè)。因此，微柱法并不能完成整個(gè)AF檢測(cè)過(guò)程，僅適用于定性檢驗(yàn)。
酶聯(lián)免疫吸附法操作簡(jiǎn)便，使用較為安全，但由于酶本身的不穩(wěn)定性，用此方法檢驗(yàn)AF有可能帶來(lái)假陽(yáng)、陰性結(jié)果，而且研制出的AF快速測(cè)試盒多以測(cè)定最/具毒性的種屬為主，食品和飼料工業(yè)上利用它來(lái)界定食品或飼料中AF的超標(biāo)問(wèn)題。酶聯(lián)免疫吸附法的檢測(cè)精度還有待于提高。
溴化熒光分光光度法的最/大/優(yōu)/點(diǎn)是檢測(cè)時(shí)不使用AF對(duì)照品，同時(shí)快速、靈敏，適合大批量樣品普查，儀器價(jià)格也較低，張雪輝等比較了用SFB法和溴衍生HPLC檢測(cè)中藥中AF的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)SFB法在測(cè)定中藥時(shí)可能出現(xiàn)許多假陽(yáng)性結(jié)果。