SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT 試劑盒是一個(gè)完整的細(xì)胞裂解物系統(tǒng)，可直接根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行基因表達(dá)分析，而無(wú)需 RNA 純化步驟。SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT 細(xì)胞裂解試劑提供了最高靈敏度的 Cells-to-CT Fast Advanced 逆轉(zhuǎn)錄酶混合物、2X RT 緩沖液和 PowerUp SYBR Green預(yù)混液。SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT 試劑盒可在現(xiàn)有最快的工作流程中為您提供您所需的靈敏度：在約1.5小時(shí)內(nèi)從整個(gè)細(xì)胞板中獲得基因表達(dá)分析結(jié)果。

•全面—優(yōu)化的工作流程包括移除 gDNA 的細(xì)胞裂解試劑、新型 Fast Advanced RT 酶混合物、緩沖液和新型 PowerUp SYBR Green Fast Advanced 預(yù)混液
•快速—7分鐘樣品制備，包括在室溫下進(jìn)行 DNase處理
•簡(jiǎn)便—可以在試管或直接在培養(yǎng)板中裂解樣品
•穩(wěn)健—可以對(duì)每個(gè)樣品10–100,000個(gè)細(xì)胞進(jìn)行基因表達(dá)分析；結(jié)果與從純化 RNA 中獲得的等效
•高效—含有足夠的試劑以從100起始樣品中生成1000實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 結(jié)果

無(wú)需從培養(yǎng)細(xì)胞中分離 RNA 的方法
Cells-to-Ct 方法具有裂解試劑，可裂解細(xì)胞并保護(hù) RNA。5在分鐘裂解步驟中同時(shí)去除 DNA，可節(jié)省時(shí)間并提高易用性。然后通過(guò)加入“終止液停止裂解，"該終止液會(huì)不可逆地與裂解試劑結(jié)合。

SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT 試劑盒含有用于 cDNA 合成的 Cells-to-Ct Fast Advanced 逆轉(zhuǎn)錄 (RT) 試劑和用于實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 分析的 PowerUp SYBR Green預(yù)混液。引物對(duì)由用戶提供。

簡(jiǎn)單7-分鐘的樣品制備
SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT 試劑10–盒專門設(shè)計(jì)用于100,000個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞/樣品。細(xì)胞先用 PBS 清洗，再于室溫下置于裂解液中裂解5分鐘；同時(shí)進(jìn)行 DNase 處理。裂解過(guò)程在加入終止液，室溫孵育 2 分鐘后終止。裂解液現(xiàn)可直接進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄或在–20°C條件下短期儲(chǔ)存，或在-80C

條件下長(zhǎng)期儲(chǔ)存。較高的檢測(cè)靈敏度
不同于某些將 RT 反應(yīng)中裂解物的量限制在10%的競(jìng)品試劑盒，SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT 試劑盒可以容納總 RT 反應(yīng)體積45%的細(xì)胞溶解產(chǎn)物。此外，cDNA 至多可占實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 反應(yīng)體積的30%。在優(yōu)化的 RT 反應(yīng)中加入大量裂解物，以及后續(xù)使用 PowerUP SYBR Green 預(yù)混液進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 反應(yīng)的大量 cDNA ，可較大限度提高靈敏度。該預(yù)混液可精確而準(zhǔn)確地對(duì)靶標(biāo)進(jìn)行擴(kuò)增，從而能夠檢測(cè)少量靶標(biāo)，如低表達(dá)水平的轉(zhuǎn)錄物。。

減少樣品損失和轉(zhuǎn)移錯(cuò)誤
由于可直接在培養(yǎng)孔（96或384孔）中處理樣品，故樣品處理和樣品損失或轉(zhuǎn)移錯(cuò)誤的可能性被降至較低，從而有益于快速、高通量的處理。與傳統(tǒng)的多步驟 RNA 分離方案不同，無(wú)需加熱、清洗或離心。該試劑盒大大簡(jiǎn)化了耗時(shí)費(fèi)力的30–60流程，將其縮短至7分鐘。

經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的性能
SYBR Green Fast Advanced Cells-to-CT 試劑盒的所有組分均經(jīng)過(guò)優(yōu)化，具有一致性且可靠的性能。這樣可以消除參與不同樣品制備、RT 和實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 試劑盒工作過(guò)程中的猜測(cè)，使您在現(xiàn)有的較快樣品至結(jié)果工作流程中獲得所需的靈敏度。

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