AP-TAG 技術(shù)改變了細(xì)胞表面受體和配體的檢測(cè)和克隆方式。本發(fā)明的本質(zhì)是允許編碼受體的任何分泌性多肽配體或胞外結(jié)構(gòu)域的cDNA序列符合讀碼框地融合至pAPtag克隆載體中的人胎盤分泌性堿性磷酸酶(AP)。所得配體-AP 融合蛋白（稱為 AP-body）在 293T 或 CHO 細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，可以高水平分泌到培養(yǎng)基中，因此可以通過 AP 活性測(cè)定或使用抗 AP 抗體的蛋白質(zhì)印跡分析輕松檢測(cè)到。因此，配體-AP或可溶性受體-AP融合蛋白可以像抗體一樣充當(dāng)親和劑，從而可以方便、安全和靈敏地檢測(cè)和克隆其相應(yīng)的細(xì)胞表面受體或配體。與傳統(tǒng)的放射性125I標(biāo)記方法不同，AP-TAG是安全的，不需要配體/可溶性受體純化。
自發(fā)明以來，AP-TAG技術(shù)已克隆了許多重要的細(xì)胞表面受體和配體，包括Leptin、Semaphorin III、Nogo-66、IL-24、Jelly Belly的受體以及Kit、Mek4和Sek受體酪氨酸激酶的配體。
如果您正在使用通過 DD 或其他方法克隆的分泌蛋白或細(xì)胞表面分子，AP-TAG 技術(shù)可以讓您進(jìn)一步對(duì)這些基因進(jìn)行功能表征。
AP-TAG Kit B
用于受體/配體相互作用的非放射性檢測(cè)。
這種單向量系統(tǒng)是第三代AP-TAG技術(shù)。分泌型配體或可溶性受體可以與分泌型堿性磷酸酶(AP)在其N端或C端融合以產(chǎn)生“AP體"。所得的 AP 融合蛋白可以作為分泌蛋白表達(dá)，并直接用作高度敏感的親和劑，就像抗體一樣。表位標(biāo)簽（6xHis 和 myc）可以輕松純化、檢測(cè)和相互作用測(cè)定 (IP) AP 融合蛋白。下面列出了其他改進(jìn)的功能。
AP-TAG Kit A
用于受體/配體相互作用的非放射性檢測(cè)。
這是使用 pAPtag-2 和 pAPtag-4 載體的第二代 AP-TAG 技術(shù)。分泌型配體或可溶性受體可以與分泌型堿性磷酸酶(AP)在其N端或C端融合以產(chǎn)生“AP體"。所得的 AP 融合蛋白可以作為分泌蛋白表達(dá)，并直接用作高度敏感的親和劑，就像抗體一樣。
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