GenMute™ siRNA Transfection Reagent 產(chǎn)品型號：SL100568
GenMute試劑是一種新型可生物降解的非脂質(zhì)體siRNA/miRNA & DNA遞送工具。用我們專有的pH依賴性構(gòu)象變化(PDCC)技術(shù)中，可生物降解的轉(zhuǎn)染劑是通過向其側(cè)鏈添加預先篩選的疏水基團來配制的GenMute試劑是功能多樣且強大的基因傳遞工具。GenMute試劑已經(jīng)被證實能有效地和可重復地轉(zhuǎn)染單個siRNA/miRNA或共轉(zhuǎn)染DNA/siRNA或DNA/miRNA到多種哺乳動物細胞。
大小和內(nèi)容:
- GenMute試劑，1.0 mL，足以在24孔板中轉(zhuǎn)染5.0 pmol siRNA或miRNA模擬物進行約2000次反應。
- GenMute轉(zhuǎn)染緩沖液(5x)，用于最大轉(zhuǎn)染效率，8.0 mL制成40 mL工作溶液。
應用:
-對多種哺乳動物細胞的單siRNA轉(zhuǎn)染或DNA/siRNA共轉(zhuǎn)染。
-單一miRNA、miRNA模擬物或抑制劑轉(zhuǎn)染或DNA/miRNA或DNA/miRNA模擬物共轉(zhuǎn)染至多種哺乳動物細胞。
存儲:
在4°C下儲存GenMute 試劑和RT用于GenMute轉(zhuǎn)染緩沖液(5x)。如果儲存得當，該產(chǎn)品可穩(wěn)定儲存12個月或更長時間。
優(yōu)勢:
-僅用1.0 nM siRNA / miRNA模擬物，在低濃度下具有優(yōu)異的沉默效果
-最小化細胞中的非特異性和脫靶效應
-單管反應
-適合廣泛的哺乳動物細胞
-極低的細胞毒性
-非常實惠
GenMute siRNA & DNA轉(zhuǎn)染劑與品牌產(chǎn)品的沉默效果比較
GenMute轉(zhuǎn)染劑(上圖)與dharma fect 4 siRNA轉(zhuǎn)染劑(中圖)的敲除功效比較以及HEK293細胞上的Lipofectamine 2000(下圖)。按照制造商的方案，通過上述三種轉(zhuǎn)染試劑，將靶向0.5-20nm不同終濃度的海腎螢光素酶的siRNA與海腎螢光素酶基因(每孔0.5g pRL-CMV DNA)共轉(zhuǎn)染到生長在24孔板中的HEK293細胞中。 用海腎螢光素酶測定系統(tǒng)(Promega)在共轉(zhuǎn)染后24小時測定海腎螢光素酶活性。用光度計(Beckman Coulter LD 400)在10s積分期間從5.0 l裂解物測量發(fā)光。熒光素酶活性為 表示為10s內(nèi)積分的光單位(RLU ),并通過使用BCA分析標準化為每毫克細胞蛋白。誤差條代表從三次實驗中得出的標準偏差。相對于未處理的細胞計算熒光素酶沉默效率。在…期間 GenMute和dharma fect 4試劑使1.0 nM的海腎熒光素酶siRNA李產(chǎn)生顯著的基因沉默pofectamine 2000僅在30納米后產(chǎn)生良好的敲除(數(shù)據(jù)未顯示)。
在HEK293細胞中用0.5升GenMu對內(nèi)源性表達的KIF11(也稱為Eg5)進行出色的沉默24孔板的每個孔中含有te試劑和5.0 pmol Eg5 siRNA。 KIF11(也稱為Eg5)編碼 一種運動蛋白，屬于 驅(qū)動蛋白樣蛋白家族參與細胞有絲分裂期間染色體定位和雙極紡錘體形成。KIF11水平的降低導致有絲分裂停滯。與陰性對照(最終10 nM)相比，GenMute試劑以每孔僅0.5 l的量有效地將Eg5 siRNA(最終10 nM，右圖)遞送至HEK293細胞。左側(cè)面板)。與陰性對照(左圖)相比，轉(zhuǎn)染后24小時(右圖)用尼康顯微鏡觀察到“聚集"293細胞的表型。
GenMute轉(zhuǎn)染試劑敲低了Hela細胞中內(nèi)源性層粘連蛋白A/C基因的表達。 通過以下方式將靶向核纖層蛋白A/C基因的siRNA(右圖)和假siRNA(左圖)導入Hela細胞(最終1.0 nM) GenMute轉(zhuǎn)染試劑。L通過免疫熒光在轉(zhuǎn)染后24小時監(jiān)測amin A/C基因沉默。用小鼠單克隆核纖層蛋白A/C特異性抗體探測核纖層蛋白A/C，然后加入FITC綴合的抗小鼠抗體。定量分析表明由GenMute轉(zhuǎn)染試劑遞送的1.0 nM的核纖層蛋白siRNA敲除了Hela細胞中94%的內(nèi)源性表達的核纖層蛋白A/C。
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