A,樹脂的選擇及氨基酸的固定
用于多肽合成的高分子的載體主要有3類:交聯(lián)聚苯乙烯;聚酰胺:聚乙烯一乙二醇脂類樹脂。氨基酸的固定主要是通過保護的氨基酸的羧基同樹脂的反應(yīng)基團之間形成共價鍵來實現(xiàn)。
B,氨基、羧基、側(cè)鏈的保護及脫除
要成功合成具有特定的氨基酸順序的多肽,需要對暫不參與形成酰胺鍵的氨基和羧基加以保護,同時對氨基酸側(cè)鏈上的活性基團也要保護,反應(yīng)完成后再將保護基團除去,近年來,F(xiàn)MOC合成法得到了廣泛的應(yīng)用。羧基通常用形成酯基的方法進行保護。甲酯和乙酯是逐步合成中保護羧基的常用方法。
C,成肽反應(yīng)
固相中的成肽反應(yīng)一般是將兩個相應(yīng)的氨基被保護的及羧基被保護的氨基酸放在溶液內(nèi)并不形成肽鍵,要形成酰胺鍵,經(jīng)常用的手段是將羧基活化,變成混合酸酐、活潑酯、酰氯或用強的縮合劑(如碳二亞氨)形成對稱酸酐等方法來形成酰胺鍵。
D,裂解及合成肽鏈的純化
BOC法用TFA+HF裂解和脫側(cè)鏈保護基,F(xiàn)MOC法直接用TFA,有時根據(jù)條件不同,其它堿、光解、氟離子和氫解等脫保護方法也被采用。合成肽鏈進一步的精制、分離與純化通常采用高效液相色譜、親和層析、毛細管電泳等。
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