Collagel® Kit

 Collagel®Kit具有用于創(chuàng)建3D細胞接種的生物I型膠原蛋白凝膠的所有組件（請參見表1）。

 Type I Collagen (3 mg/ml in 0.01 M HCl)

 5X MEM

 Fetal Bovine Serum

 1M Hepes

 0.1 M NaOH in 5X MEM

 一般用途的制備1 MLCOLLAGEL®膠原蛋白凝膠的協(xié)議

 1.在1.5 ml離心管中，合并160μl試劑A，80μl試劑B和20μl試劑C。
2.在另一個1.5 ml離心管中，合并700μlCollagel®和40μl試劑D。充分混合后，確保Collagel®/ Reagent D混合物的pH值為7.0 – 7.2。 如果不是，則加入2.5μl試劑D，混合均勻，然后再次測試。 重復(fù)直至pH在所需范圍內(nèi)。
3.合并兩個試管，并用移液器充分混合。
4.此凝膠溶液可用于重懸細胞沉淀或其他成分以進行鋪板。 參見圖2，了解37°C下的凝膠動力學(xué)。

 在FLEXCELL®線性組織TRAIN®培養(yǎng)板中植入生物人工細胞水合物（BAT）的協(xié)議

 1.根據(jù)您選擇的培養(yǎng)基中用于原代培養(yǎng)或連續(xù)細胞系的既定方案準備細胞。
2.用0.05％的胰蛋白酶，胰蛋白酶-EDTA，0.05％的細菌膠原酶或其他方法釋放細胞。
3.向細胞添加含血清的培養(yǎng)基，以中和胰蛋白酶或膠原酶。
4.計數(shù)細胞并確定所需的細胞數(shù)量，對于6孔TissueTrain®培養(yǎng)板的每個孔，在150-200 ulCollagel®膠原蛋白凝膠中約50,000-200,000個細胞。注意：3D凝膠中的細胞接種密度將根據(jù)細胞類型而變化。我們建議測試細胞接種密度，以確定適合您的應(yīng)用和細胞類型的細胞數(shù)。
5.用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，以去除胰蛋白酶或膠原酶。
6.將帶有墊片的TissueTrain®板放置在Trough Loader™的頂部，并確保正確放置以實現(xiàn)密封真空。
7.使用Flexcell®FX-5000™張力系統(tǒng)啟動大伸長率（?90 kPa）靜態(tài)下拉方案。注意：對于標準Collagel®，建議2小時的膠凝時間。還建議每6秒以大2％的大伸長率緩慢釋放真空，直到達到0％的伸長率。
8.準備Collagel®培養(yǎng)基基質(zhì)，請參見下表中的示例體積。在1.5毫升試管（未提供）中混合試劑A，B和C。在5.0毫升試管（未提供）中，將試劑D添加到Collagel®中并充分混合（*混合的溶液應(yīng)變成淺桃紅色）。取出10 µl ReagentD-Collagel®混合物，并涂在pH紙（未提供）上，以確保pH為中性（7.0-7.2是理想的）。注意：如果不是，則添加2.5 µL試劑D，然后再次檢查。重復(fù)直至pH在所需范圍內(nèi)。將試劑A，B，C的混合物添加到Collagel®混合物中，然后通過移液將其充分混合。將所有試劑保持在4°C或在冰上制備。

Thermacol® Kit

 Thermacol®試劑盒具有用于創(chuàng)建3D細胞接種的生物I型膠原蛋白凝膠的所有組件（請參見表1），此外還添加了含端肽的膠原蛋白，這為混合液在低溫（4°C）下提供了更高的穩(wěn)定性，不同 膠凝后的物理特性，以及快速可控的膠凝動力學(xué)。

 一般使用的1毫升THERMOCOL®膠原蛋白凝膠制備協(xié)議

 1.在1.5 ml離心管中，合并160μl試劑A，80μl試劑B和20μl試劑C。
2.在另一個1.5 ml離心管中，合并1,630μlCollagel®，70μlThermacol®和40μl試劑D。充分混合后，確保Collagel®/ Reagent D混合物的pH值為7.0 – 7.2。 如果不是，則加入2.5μl試劑D，混合均勻，然后再次測試。 重復(fù)直至pH在所需范圍內(nèi)。
3.合并兩個試管，并用移液器充分混合。
4.此凝膠溶液可用于重懸細胞沉淀或其他成分以進行鋪板。 關(guān)于在37°C下的凝膠化動力學(xué)，請參見圖2。