微圖案細(xì)胞有絲分裂高通量跟蹤表征系統(tǒng)，高通量細(xì)胞有絲分裂跟蹤表征系統(tǒng)

MITosis高通量細(xì)胞有絲分裂跟蹤表征系統(tǒng)

在一個平臺內(nèi)處理所有必要的圖像處理步驟，以檢測和分析通過有絲分裂接種在微圖案上的單個細(xì)胞。

通過使用延時熒光顯微鏡對活細(xì)胞進(jìn)行可重復(fù)的分析，微圖案的使用已經(jīng)改變了動態(tài)生物過程的研究。 借助微圖案，可以對數(shù)千個單個細(xì)胞進(jìn)行高效并行成像，從而使該方法適合篩選項目。

對微模式上的單個有絲分裂細(xì)胞進(jìn)行高通量分析，從而準(zhǔn)確有效地允許從延時記錄中自動確定紡錘體定位。

有絲分裂期間發(fā)生的動態(tài)事件，包括主軸定位，可以使用延時顯微鏡進(jìn)行忠實(shí)監(jiān)測。 紡錘體定位是動物發(fā)育和組織穩(wěn)態(tài)過程中細(xì)胞分裂軸正確定位的基礎(chǔ)。 在無脊椎動物模型系統(tǒng)中進(jìn)行的正向遺傳和功能基因組篩選導(dǎo)致鑒定出被證明廣泛需要紡錘體定位的成分，包括在人類細(xì)胞中。 相比之下，直接在哺乳動物細(xì)胞中進(jìn)行篩選以識別對該過程重要的基因的篩選較少，并且沒有一個篩選依賴于對活細(xì)胞的監(jiān)測。 因此，很可能尚未完了解控制哺乳動物系統(tǒng)中紡錘體定位的機(jī)制。 為了這一空白，我們提供了一個基于 siRNA 的屏幕，用于使用延時顯微鏡在人類細(xì)胞中定位中期紡錘體的新型調(diào)節(jié)器。

A：表達(dá) mCherry::histone 2B 的單個 HeLa 細(xì)胞示例，生長在涂有纖連蛋白 Alexa fluor 555 的 L 形微圖案上，并使用延時顯微鏡進(jìn)行監(jiān)測。頂部：延時顯微鏡實(shí)驗(yàn)的原始數(shù)據(jù)；時間以小時表示；底部：相應(yīng)的示意圖。請注意，示意圖中顯示的電池輪廓僅用于說明目的，并未通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)行監(jiān)測。播種后，間期細(xì)胞在微圖案上定向，使細(xì)胞核位于 L 的兩個臂之間的中央。在有絲分裂中細(xì)胞變圓后，中期細(xì)胞板與 L 的臂成 ~ 45° 角定位L 形微圖案。乙：在涂有 L 形微圖案的 96 孔板中生長的細(xì)胞視野示例，使用延時顯微鏡進(jìn)行監(jiān)測；時間以小時表示。在較低放大倍率視圖中用藍(lán)色插圖突出顯示的區(qū)域在下方放大，以說明必須由 TRACMIT 區(qū)分的不同類別的細(xì)胞：綠色（可分析）：細(xì)胞正確定位在微圖案上并在記錄期間分裂；紅色 [ 1 ]，空：微圖案上沒有細(xì)胞；紅色 [ 2 ]，擁擠：微圖案上有一個以上的細(xì)胞；紅色 [ 3 ]，錯誤位置：L 的一只手臂上的細(xì)胞；紅色 [ 4 ]，不分裂：細(xì)胞在記錄過程中不分裂。插圖中的比例尺 = 10μm

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