EXO-FBS-50A-1(SBI)無外泌體血清
貨號(hào):EXO-FBS-50A-1
品牌:SBI
規(guī)格:50ml
當(dāng)外泌體在1980年被發(fā)現(xiàn)后,其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對(duì)其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號(hào)的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型,其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、腫瘤侵襲等方方面面。有研究表明腫瘤來源的外泌體參與到腫瘤細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換,從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,促進(jìn)了腫瘤的生長與侵襲。
外泌體——基礎(chǔ)知識(shí)篇
細(xì)胞外囊泡(Extracellular Vesicles,EVs)是指細(xì)胞主動(dòng)分泌的具有膜結(jié)構(gòu)的微小囊泡的統(tǒng)稱,幾乎所有的細(xì)胞都會(huì)分泌EVs,然而EVs最初被認(rèn)為是細(xì)胞向外排泄的“垃圾",是細(xì)胞移除碎片和清除特定大分子的一種途徑。根據(jù)大小、生物特性和形成過程的不同,EVs主要分為外泌體(exosomes)、微囊泡(microvesicles)、和凋亡小體(apoptotic bodies)三大類。近十年來,研究學(xué)者重新認(rèn)識(shí)了EVs的重要性,越來越多的研究發(fā)現(xiàn)EVs可以作為遺傳信息的傳遞者,攜帶和傳遞信號(hào)分子運(yùn)輸?shù)较噜忂h(yuǎn)處的細(xì)胞,從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理和病理的狀態(tài),參與許多疾病的發(fā)生發(fā)展過程,其中對(duì)于外泌體的研究最為火熱。
更多外泌體生物合成等信息,請(qǐng)點(diǎn)擊閱讀:外泌體入門新手看這里~|福利來咯!
外泌體——研究思路篇
01外泌體的樣本來源
由于研究細(xì)胞分泌的外泌體,需要避免培養(yǎng)基中其它外源性外泌體對(duì)細(xì)胞分泌外泌體的影響,目前采用以下方法獲取研究樣本:血清饑餓培養(yǎng)、去外泌體血清培養(yǎng)、無血清體系培養(yǎng)、其它樣本來源。
01血清饑餓培養(yǎng)
一般是指通過降低培養(yǎng)液中的血清濃度,使所培養(yǎng)的細(xì)胞因缺乏血清中的生長因子而不能分裂,這個(gè)操作常用來做細(xì)胞同步化分裂。常規(guī)操作就是在細(xì)胞培養(yǎng)至融合度為50-60%左右,撤去含血清的*培養(yǎng)基,更換為基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)行饑餓培養(yǎng)細(xì)胞至融合度為80%左右,收獲細(xì)胞上清進(jìn)行下游的研究。但血清饑餓培養(yǎng)收獲的外泌體量有限且質(zhì)量較低。
02去外泌體血清培養(yǎng)
為了減少或避免血清饑餓培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞分泌外泌體的影響,去外泌體血清培養(yǎng)細(xì)胞成為大多數(shù)學(xué)者選擇的一種方式。去外泌體血清可適用于大部分細(xì)胞培養(yǎng),基本可維持與正常胎牛血清中相同生長速率和形態(tài)。在使用各種方法去除胎牛血清中大部分的外泌體后添加至培養(yǎng)基中配制成去外泌體血清*培養(yǎng)基,應(yīng)用于細(xì)胞外泌體的研究。
03無血清體系培養(yǎng)
從饑餓培養(yǎng)到去外泌體血清培養(yǎng),再到無血清體系培養(yǎng)。這是針對(duì)外泌體研究所做出的培養(yǎng)基改善與優(yōu)化。也讓學(xué)者們能夠了解到細(xì)胞培養(yǎng)所需要的營養(yǎng)成分。目前無血清體系的培養(yǎng)基可分為含血小板裂解物(含外泌體)的無血清培養(yǎng)基、配方明確的無血清培養(yǎng)基等,其中配方明確的無血清體系讓研究細(xì)胞外泌體的結(jié)果更加準(zhǔn)確。
04其它外泌體樣本的來源
除了細(xì)胞來源的外泌體樣本研究最為廣泛,血漿、血清也是多數(shù)學(xué)者的研究樣本,其它的樣本包括唾液、腦脊液、乳汁、尿液等生物體液,均可以作為外泌體研究的樣本來源。
HeLa 人宮頸癌細(xì)胞
143B 人骨肉瘤細(xì)胞
293T 人胚腎細(xì)胞
A2780 人卵巢癌細(xì)胞
A549 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
A673 人尤因肉瘤細(xì)胞
AGS 人胃腺癌細(xì)胞
BGC823 人胃腺癌細(xì)胞(低分化)
C33A 人宮頸癌細(xì)胞
CACO2 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
COLO205 人結(jié)腸癌細(xì)胞
DU145 人前列腺癌細(xì)胞
ES-2 人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞
H1650 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
H460 人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞
HACAT 人永生化表皮細(xì)胞
HCT116 人結(jié)腸癌細(xì)胞
HEK-293 人胚腎細(xì)胞
HEPG2 人肝癌細(xì)胞
HGC-27 人胃癌細(xì)胞(未分化)
HT-29 人結(jié)腸癌細(xì)胞
t24 人膀胱癌細(xì)胞
KYSE150 人食道癌細(xì)胞
L02(HL7702)(QSG-7701)(7402)(bel7404) 人正常肝細(xì)胞
LOVO 人結(jié)腸癌細(xì)胞
MCF-10A 人正常乳腺上皮細(xì)胞
MCF7 人乳腺癌細(xì)胞
LX-2 人肝星狀細(xì)胞
MDA-MB-468 人乳腺癌細(xì)胞
MIA Paca2 人胰腺癌細(xì)胞
NCI-H1299 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
PANC-1 人胰腺癌細(xì)胞
RBE 人肝膽管癌細(xì)胞
SAOS-2 人成骨肉瘤細(xì)胞
SiHa 人子宮頸鱗癌細(xì)胞
NB 4 急性早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞
SPC-A-1 人肺腺癌細(xì)胞
SW480 人結(jié)腸癌細(xì)胞
U-87MG 人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞
ZR-75-1 人乳腺癌細(xì)胞
SW1116 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
293A 人胚腎細(xì)胞
SGC-7901 人胃腺癌細(xì)胞
Ishikawa 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞
Eca-109 人食管癌細(xì)胞
RD-ES 人尤文氏肉瘤
NCI-H1437 人肺癌細(xì)胞
HOS 人骨肉瘤細(xì)胞
Hela S3 人宮頸癌細(xì)胞
ECC1 人宮頸內(nèi)膜腺癌細(xì)胞
SUP-B15 人Ph+急淋白血病細(xì)胞系
TF-1 人血液白血病細(xì)胞
NCI-H446 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
GES-1 人胃正常黏膜上皮細(xì)胞
IOSE80 人卵巢正常上皮細(xì)胞株
sw-13 人腎上腺皮質(zhì)小細(xì)胞癌細(xì)胞
KGN 人卵巢顆粒細(xì)胞癌
U937 人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
SV-HUC-1 人膀胱上皮永生化細(xì)胞
tpc-1 人乳頭瘤狀甲狀腺癌細(xì)胞
hela-luci Luciferase穩(wěn)定表達(dá)Hela細(xì)胞
colo320 人結(jié)腸癌細(xì)胞
bxpc-3 人胰腺腺癌細(xì)胞
raji 人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞
5637 人膀胱癌細(xì)胞
chang-liver 人肝細(xì)胞(已被hela污染)
a549-gfp gfp標(biāo)記的A549細(xì)胞
hs578.t 人乳腺癌細(xì)胞
T24 人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞
K562 人慢性髓系白血病細(xì)胞
EH-GB1 人膽囊癌細(xì)胞
skov-3 人卵巢腺癌細(xì)胞
ECV304 人膀胱癌細(xì)胞(T24衍生物)
nci-n87 人胃癌細(xì)胞
B-CPAP 人甲狀腺癌細(xì)胞
NCI-H1975 人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞
HK-2 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞
J82 人膀胱癌細(xì)胞
A431 人皮膚鱗癌細(xì)胞
MG63 人骨肉瘤細(xì)胞
SW48 人結(jié)腸癌細(xì)胞
ME180 人宮頸表皮樣癌
hepaRG-GFP Gfp標(biāo)記的人肝癌細(xì)胞
BEAS-2B 人正常肺上皮細(xì)胞
THP-1 人髓系白血病單核細(xì)胞
PC-9 人肺癌細(xì)胞
Fadu 人咽鱗癌細(xì)胞
Huh7 人肝癌細(xì)胞
HCCC9810 人肝癌細(xì)胞
Jurkat cloneE6-1 人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞
KBM-7 人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞
GBC-SD 人膽囊癌細(xì)胞
JEKO-1 人套細(xì)胞淋巴癌細(xì)胞
CAL-27 人口腔鱗癌
DB 彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
mp38
nci-h226 人肺鱗癌細(xì)胞
hepg2.2.15 人肝癌細(xì)胞
SK-BR-3 人乳腺腺癌細(xì)胞
SNU-1 人胃癌細(xì)胞
su-dhl-6 人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
HL-60 人早幼粒急性白血病細(xì)胞株
nk-92mi 人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞
kg-1 人急性骨髓性白血病細(xì)胞
nci-h209 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
sk-hep-1 人肝癌細(xì)胞
sw579 人甲狀腺鱗癌細(xì)胞
nthy-ori-3-1 人甲狀腺正常細(xì)胞
bt474 人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞
ncm460 人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞
hmec-1 人微血管內(nèi)皮細(xì)胞
mrc5 人胚肺細(xì)胞株
t2 (atcc) 人T2細(xì)胞
22rv1 人前列腺癌細(xì)胞
hct8 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
786-o 人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞
SKOV3-GFP 轉(zhuǎn)染GFP的人卵巢癌細(xì)胞
RKO 人結(jié)腸癌細(xì)胞
calu-1 人肺癌細(xì)胞
kb 人口腔表皮樣癌細(xì)胞
ovcar3 人卵巢腺癌細(xì)胞
u937-dc-sign 人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
a375 人惡性黑色素瘤瘤株
u2OS 人成骨肉瘤細(xì)胞
h69ar 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
sk-mel-28 人皮膚惡性黑色素瘤
95D 人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞
nci-h226 人肺鱗癌細(xì)胞
calu3 人肺腺癌細(xì)胞
C666-1 人鼻咽癌細(xì)胞
HT1080 人纖維肉瘤細(xì)胞
ASPC-1 人胰腺癌細(xì)胞
TT 人髓樣甲狀腺腫瘤細(xì)胞
NOZ 人膽囊癌細(xì)胞
HCCLM3 人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞
mda-mb-453 人乳腺癌細(xì)胞
TFK-1 人膽管癌細(xì)胞
FHs 74 Int 人小腸上皮細(xì)胞
H9胚胎干細(xì)胞 人胚胎干細(xì)胞
caki-2 人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞
mda-mb-231 人乳腺癌細(xì)胞
pc3 人前列腺細(xì)胞
EXO-FBS-50A-1(SBI)無外泌體血清
如何鑒定提取出來的外泌體?
以目前外泌體的分離手段很難獲得十分純凈而且單一的外泌體樣品,也沒有任何一個(gè)單一實(shí)驗(yàn)可以確定外泌體的存在。根據(jù)國際細(xì)胞外囊泡協(xié)會(huì)發(fā)表的指導(dǎo)手冊《MISEV 2018》,外泌體特征鑒定通過NTA測粒徑分布、TEM電鏡分析形態(tài)、WB檢測標(biāo)志蛋白三項(xiàng)來驗(yàn)證。NTA分析樣品中外泌體的粒徑分布和顆粒濃度,TEM電子顯微鏡來觀察樣品中外泌體的形態(tài)特征,WB檢測外泌體標(biāo)志蛋白。
外泌體如何保存?
不同時(shí)間、溫度的保存對(duì)不同的外泌體樣本影響不一;如果研究方向?yàn)橥饷隗w形態(tài)特征、蛋白或其他功能性分析,在分離后新鮮使用為最佳。目前主流的建議是提取出外泌體后最好是新鮮使用,或低溫短期保存。
短時(shí)間幾天內(nèi)可以放4°C,長時(shí)間儲(chǔ)存置于-80°C保存。
NTA檢測可以進(jìn)行外泌體定量嗎?
NTA是物理方法,基于顆粒的布朗運(yùn)動(dòng),因?yàn)椴还苁侵|(zhì)體、蛋白,甚至是PBS中的顆粒(部分實(shí)驗(yàn)室自行配置的PBS中發(fā)現(xiàn)大量顆粒,推薦在外泌體研究中,用VC品牌的PBS(P/N:C3580-0500),避免干擾),都會(huì)被軟件讀取,并不能分辨是否為外泌體。但NTA提供的粒徑分布可供判斷所提取的內(nèi)含物是否在外泌體的粒徑范圍內(nèi);另外,在做外泌體分泌的對(duì)比實(shí)驗(yàn)中,NTA提供的濃度值也可以作為重要的參考數(shù)據(jù)。
外泌體NTA檢測需要多少量?
Zetaview儀器的最佳檢測區(qū)間是10^7 particles/ml,且有濃度檢測下限,為10^5 particles/ml,一般進(jìn)樣量不少于2 ml;
無法準(zhǔn)確建議送樣量,檢測需要量與樣本本身濃度有關(guān),樣本濃,則用量小,反之則多,根據(jù)檢測經(jīng)驗(yàn),樣本取用量一般在2 µl-100 µl不等,取用量大于50 µl時(shí)大多由于樣本分泌量過低、提取失敗或者對(duì)樣本有過多稀釋。
一般建議:送樣量不低于30 µl。
外泌體用什么分離方法比較好?
無法明確哪種分離方法比較好,各有千秋,以下列出常用的外泌體分離方法:
超速離心法(差速離心和密度梯度離心):操作繁瑣,耗時(shí)長,分離外泌體純度較高,但得率低,目前分離外泌體主流方法;
尺寸排阻色譜(Size-exclusion chromatography,SEC):應(yīng)用填充多孔聚合物微球的柱子,精確分離大小分子,操作簡便,耗時(shí)短,分離外泌體純度較高;
聚合物沉淀法:操作簡便,耗時(shí)短,可能會(huì)同時(shí)分離非囊泡污染物(包括脂蛋白),分離外泌體純度較低;
磁珠免疫法:通過特定的抗體組合從樣本中捕獲不同類型的外泌體,免疫親和技術(shù)具有高特異性、可獲得高純度的外泌體、且不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),是富集表征*的外泌體的優(yōu)選方法。但是此方法效率低,外泌體內(nèi)含物的生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。
組合方法:如聚合物沉淀法+SEC (CellGS Exo-spin 外泌體純化試劑盒)純化流程溫和,無需高速離心,操作簡便并且產(chǎn)物純度高,分離出的外泌體完好無缺,適用于下游功能研究、WB驗(yàn)證、RNA分析等。