疏水預(yù)裝柱 萃取

疏水層析（HIC）的分離是基于蛋白質(zhì)的疏水性氨基酸與基質(zhì)的疏水性配基之間的可逆性相互作用。

蛋白質(zhì)和多肽的疏水氨基酸大多埋藏在蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的內(nèi)部。然而，仍然有一些疏水性氨基酸會(huì)暴露在蛋白分子的表面與基質(zhì)的疏水性配基進(jìn)行相互作用。與反相層析相比，疏水作用層析基質(zhì)上的配體濃度要低很多，洗脫條件也更加溫和，從而有助于保持生物分子的生物活性。HIC特別適合于純化經(jīng)過(guò)硫酸銨沉淀或高鹽洗脫后的樣品，高離子強(qiáng)度可以加強(qiáng)蛋白與填料配基之間的疏水相互作用。

高離子強(qiáng)度的緩沖液可以增強(qiáng)疏水相互作用，這使得HIC成為硫酸銨沉淀和離子交換層析的一個(gè)純化步驟。HIC非常適合于純化工藝中的捕獲或中純步驟。

HIC期間，樣品成分在高離子強(qiáng)度的緩沖液（典型的是1~2M的硫酸銨或者是3M的NaCl）中結(jié)合到填充柱上。高濃度的鹽，尤其是硫酸銨，可能會(huì)沉淀蛋白質(zhì)。因此，需要檢測(cè)將要使用的結(jié)合條件下靶蛋白的溶解性。通常采用降低的鹽梯度對(duì)靶蛋白進(jìn)行連續(xù)梯度或分布梯度洗脫。

疏水預(yù)裝柱 萃取

根據(jù)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，處于水溶液中的蛋白質(zhì)會(huì)不同程度的暴露在分子表面。這些暴露的殘基既有親水性的氨基酸（比如帶電荷的氨基酸），或者疏水性氨基酸（如苯丙酰胺、酪氨酸、色氨酸）。一般而言，疏水基團(tuán)更喜歡埋藏在蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的內(nèi)部，但是有些基團(tuán)會(huì)暴露。高濃度的鹽可以使蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)之間進(jìn)行結(jié)合而從溶液中析出或形成結(jié)晶。從Hofmeister開始，科學(xué)家們已經(jīng)認(rèn)識(shí)到不同類型的鹽在蛋白質(zhì)分子間的相互結(jié)合或疏水表面之間的相互作用過(guò)程中起到了重要的作用。

這些現(xiàn)象形成疏水作用層析（HIC）的基礎(chǔ)。根據(jù)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和一系列可控因素包括鹽濃度、pH、溫度和有機(jī)溶劑，含有疏水基團(tuán)的層析基質(zhì)以不同程度結(jié)合水溶液中的蛋白質(zhì)，如下圖所示。

HIC適合純化過(guò)程的所有步驟。應(yīng)用實(shí)例包括高產(chǎn)量捕獲、單克隆抗體精細(xì)純化、分離全長(zhǎng)形式的蛋白和截短體、活性物質(zhì)和無(wú)活性物質(zhì)的分離以及病毒清除。