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Prepacked Desalting Column 葡聚糖凝膠過濾層析填料蛋白純化脫鹽柱簡介
Prepacked Desalting Column適用于分子量大于5000Da的蛋白或其他大分子樣品的脫鹽、緩沖液置換或小分子的去除。
Prepacked Desalting Column 葡聚糖凝膠過濾層析填料蛋白純化脫鹽柱裝有8.3 ml Smartdex G-25中。Smartdex G-25系列介質是以葡聚糖為基質的凝膠過濾層析介質,其工作原理主要是利用具有網(wǎng)狀結構的葡聚糖凝膠的分子篩作用,根據(jù)被分離物質的分子大小不同來進 行分離。
表 1. Prepacked Desalting Column 產(chǎn)品性能
介質 | Smartdex G-25 中 |
粒徑 | 85-260 pm |
柱體積 | 8.3 ml |
最大上樣量 | 2.5 ml |
脫鹽效率 | >90% |
排阻極限 | Mr 5000 |
保存溫度 | 2-8 °C |
2. 使用說明
2.1緩沖液的準備
所用水和緩沖液在使用之前建議用0.22 pm或0.45 pm濾膜過濾。 平衡液為蛋白脫鹽后,用于保護蛋白的溶液,根據(jù)客戶需求自行選擇。
2.2樣品準備
樣品在上樣前建議離心或用0.22 pm或0.45|jiti濾膜過濾,減少雜質,防止堵塞柱子。
2.3樣品脫鹽
圖1.使用Prepacked Desalting Column脫鹽流程示意圖
1) 脫鹽柱準備
將Prepacked Desalting Column垂直置于重力柱支架上,或用鐵架臺固定,先后打開上蓋、下蓋,依靠重力流干保護液。
2) 平衡
加入4 ml平衡液(自主選擇合適溶液)對預裝介質進行平衡,重復5次,最終使用平衡液體積約3倍介質體積。
3) 上樣
加入樣品,樣品上樣體積范圍1.0-2.5 ml,最大不超過2.5 ml,上樣體積不足時用平衡液稀釋樣品至1.0 mlo
4) 洗脫
待樣品進入填料后,繼續(xù)加入平衡液進行洗脫,分管收集洗脫液,從加入樣品開始,先收集前端2.0 ml,然后再按照固定體積(建議0.5-1 ml/管)收集樣品,檢測每管蛋白濃度和鹽濃度,計算回收率和脫鹽效率。平衡液至少添加至蛋白洗脫*再停止。
5) 再平衡
加入4 ml平衡液對介質進行再平衡,重復至少5次,將殘留的鹽沖洗干凈,方可進行下一次脫鹽。同一個柱子不建議用于不同樣品的脫鹽。
3. 清洗及保存
如果柱子的流速或者脫鹽效果變差,為除去殘留的雜質,如變性蛋白或脂質等,有時需要對脫鹽柱進行在位清洗。常用的清洗液為0.1-0.2 M NaOH或非離子型去垢劑。
1) 加入一倍的柱體積0.1-0.2 M NaOH,依靠重力清洗介質。
2) 加入足夠量的去離子水,沖洗介質,直至pH值至中性。
3) 加入至少三倍柱體積20%乙醇溶液沖洗介質,然后蓋好上蓋和下塞,在介質上端保留至少1cm高的20%乙醇保護液,置于2-8°C保存。 注:不建議介質多次重復再生和使用。
4 .Prepacked Desalting Column 葡聚糖凝膠過濾層析填料蛋白純化脫鹽柱 訂購信息
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