德國 NanoTemper 公司于2010年推出的Monolith系列微量熱泳動(dòng)儀，提供了一種簡捷、快速分析生物分子相互作用的方法。Monolith系列微量熱泳動(dòng)儀，可在溶液中測定生物分子間相互作用，小到離子，大到病毒顆粒，10分鐘即可獲得親和力數(shù)據(jù)。已有600家高校、科研機(jī)構(gòu)和企業(yè)使用Monolith系列微量熱泳動(dòng)儀進(jìn)行生物分子相互作用研究，發(fā)表文獻(xiàn)超過2000篇。
產(chǎn)品優(yōu)勢：
- 迅速獲得試驗(yàn)結(jié)果：10 分鐘之內(nèi)完成親和力測定；
- 適用于所有類型樣品：不受樣品大小和分子量限制；
- 樣品準(zhǔn)備簡單：溶液中直接測定，無需表面固定；
- 樣品用量極少：測定Kd值僅需要數(shù)ng樣品；
- 無需蛋白純化：熒光融合蛋白可無需純化，直接在裂解液中進(jìn)行試驗(yàn)；
- 試驗(yàn)優(yōu)化方便：數(shù)據(jù)直接體現(xiàn)樣品性質(zhì)；
Monolith NT.115主要參數(shù)：
- 可測定樣品類型：離子、化合物、核酸、多肽、蛋白、糖類、脂質(zhì)體、納米顆粒、病毒等；
- 測定親和力（KD值）范圍：1 pM – mM；
- 測定樣品的分子量范圍：101 - 107 Da；
- 獲得親和力所需要的蛋白樣品量小于0.5 μg；
- 一次可測定的樣品數(shù)量：16個(gè)；
- 每個(gè)樣品所需體積：4 μL；
- 獲得親和力所需要的測定時(shí)間：10 min；
- 測定緩沖液沒有限制，包括但不限于含去垢劑的緩沖液、含DMSO（0-*）等有機(jī)溶劑的緩沖液、細(xì)胞裂解液、上清液、血清、血漿、組織勻漿等。
- 除測定親和力外，還可測定化學(xué)計(jì)量數(shù)，即生物分子結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)目；熱力學(xué)參數(shù)：ΔG (自由能 )、ΔH (焓)、ΔS (熵)；進(jìn)行競爭性試驗(yàn)，獲得Ki；區(qū)分多次結(jié)合，分別計(jì)算多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的親和力；測定蛋白寡聚化的親和力和動(dòng)力學(xué)；
- 儀器無需預(yù)熱可直接開機(jī)使用，實(shí)驗(yàn)完成后不需要對(duì)儀器進(jìn)行清洗維護(hù)；
檢測原理：
微量熱泳動(dòng)（MST） 是一種定量分析生物分子間相互作用的有效方法。它檢測分子在微觀溫度梯度場中的運(yùn)動(dòng)，探測其水化層、電荷以及分子大小的變化。MST將熒光檢測的與熱泳動(dòng)的靈活性及靈敏度結(jié)合起來，快速、可信地檢測分子間相互作用。MST 測試時(shí)，由紅外激光建立微觀溫度梯度場，通過熒光染料標(biāo)記、熒光融合蛋白、色氨酸自發(fā)熒光等信號(hào)追蹤，分子在微觀溫度梯度場中的定向移動(dòng)就可以被探測和量化。
參考文獻(xiàn)：
Cell : "M*lent Small-Molecule Pan-RAS Inhibitors." Matthew E. W., et al. Cell, 2017, 168, 878-889
Science : "Precursor processing for plant peptide hormone maturation by subtilisin-like serine proteinases." Katharina S., et al. Science 2016, 354, 1594-1597
Science : "Competition between MPS1 and microtubules at kinetochores regulates spindle checkpoint signaling." Yoshitaka H., et al. Science 2015, 348, 1264-1267
Nature : “Molecular basis of nitrate uptake by the plant nitrate transporter NRT1.1.”Parker and Newstead, Nature, 2014, 507, 68-72
