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更新時(shí)間:2020-05-14 15:40:09瀏覽次數(shù):1584次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 化工儀器網(wǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染熒光蛋白實(shí)驗(yàn)
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原位雜交(In situ hybridization)是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過(guò)程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。根據(jù)所用探針和靶核酸的不同,原位雜交可分為DNA-DNA雜交,DNA-RNA雜交和RNA-RNA雜交三類。按其作用方式分為固相雜交和液相雜交。
熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization, FISH)是在20世紀(jì)80年代末在放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非放射性分子細(xì)胞遺傳技術(shù),以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導(dǎo)分子(reporter molecule)結(jié)合,雜交后再通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)過(guò)程連接上熒光染料。FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯(lián)的單克隆抗體與探針?lè)肿犹禺愋越Y(jié)合來(lái)檢測(cè)DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對(duì)定量分析。
基本步驟:
1. 玻片的準(zhǔn)備和樣品固定
2. 細(xì)胞或組織的預(yù)滲透處理
3. 靶DNA變性(DNA原位雜交)
4. 探針制備
5. 原位雜交過(guò)程
6. 雜交后洗滌
7. 探針(顯色)檢測(cè)
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