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        1. 安諾倫(北京)生物科技有限公司
          中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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          原位雜交實(shí)驗(yàn)

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          更新時(shí)間:2020-05-14 15:40:09瀏覽次數(shù):1584次

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          原位雜交(In situ hybridization)是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過(guò)程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。根據(jù)所用探針和靶核酸的不同,原位雜交可分為DNA-DNA雜交,DNA-RNA雜交和RNA-RNA雜交三類。按其作用方式分為固相雜交和液相雜交。

          原位雜交(In situ hybridization)是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過(guò)程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。根據(jù)所用探針和靶核酸的不同,原位雜交可分為DNA-DNA雜交,DNA-RNA雜交和RNA-RNA雜交三類。按其作用方式分為固相雜交和液相雜交。

           

          熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization, FISH)是在20世紀(jì)80年代末在放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非放射性分子細(xì)胞遺傳技術(shù),以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導(dǎo)分子(reporter molecule)結(jié)合,雜交后再通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)過(guò)程連接上熒光染料。FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯(lián)的單克隆抗體與探針?lè)肿犹禺愋越Y(jié)合來(lái)檢測(cè)DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對(duì)定量分析。

           

          基本步驟:

          1.        玻片的準(zhǔn)備和樣品固定

          2.        細(xì)胞或組織的預(yù)滲透處理

          3.        靶DNA變性(DNA原位雜交)

          4.        探針制備

          5.        原位雜交過(guò)程

          6.        雜交后洗滌

          7.        探針(顯色)檢測(cè)

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