孟氏尖旋線蟲PCR檢測試劑盒原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

特異性強

PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。

 

適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽性對照：有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。
（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長期。
2.標本結(jié)果判定：
（1）陽性：標本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
（2）可疑：標本檢測結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi)。此時應對標本進行重復檢測，如重復實驗結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長期，則判定為陽性，否則為陰性。
（3）陰性：標本檢測結(jié)果Ct值＞38或無Ct值。

PCR實驗步驟:
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應，使目的DNA得以迅速擴增。
其主要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

CD81 antibody [Eat 2] (Phycoerythrin)原裝、分裝穿心蓮內(nèi)酯

Noxa antibody原裝、分裝穿心蓮內(nèi)酯

Neurogranin antibody原裝、分裝穿心蓮內(nèi)酯（標準品）

Semaphorin 7a antibody原裝、分裝芹菜素

Nectin 2 antibody [R2.525]原裝、分裝芹菜素

CD11c antibody [FK24]原裝、分裝芹菜素

S. cerevisiae GAL4 peptide原裝、分裝芹菜素(標準品)

CD41 antibody [CO.35E4]原裝、分裝齊墩果

CD8 beta antibody [2ST8.5H7]原裝、分裝齊墩果NOXA1 antibody原裝、分裝蕊草素I；山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷；阿福豆苷(標準品）

USP19 antibody原裝、分裝寶藿苷I,羊藿次苷II(標準品）

C1QL1 antibody原裝、分裝寶藿苷I,羊藿次苷II(標準品）

PRSS21/ESP1 antibody原裝、分裝貝母素（標準品）

SDS antibody原裝、分裝貝母素（標準品）

Pseudomonas antibody原裝、分裝貝母辛（標準品）

Pseudomonas antibody (Biotin)原裝、分裝苯酰次烏頭原（標準品）

Enterococcus antibody原裝、分裝苯酰烏頭原（標準品）

Recombinant Rubella Virus capsid protein原裝、分裝蝙蝠葛(標準品)
孟氏尖旋線蟲PCR檢測試劑盒Selenophosphate synthetase 1 antibody原裝、分裝褪黑素-d4

Rbm15/OTT antibody原裝、分裝鹽美侖

SIGLEC9 antibody原裝、分裝美侖N氧化物-d8

RAMP2 antibody原裝、分裝鹽美侖-d8

Frizzled 5 antibody原裝、分裝9-米諾環(huán)素二鹽-d6

STIP1/STI1 antibody原裝、分裝9-米諾環(huán)素二鹽

MAP4K5 antibody原裝、分裝7-單一去基米諾環(huán)素-d3

PON2 antibody原裝、分裝7-單一去基米諾環(huán)素

Recombinant S. cerevisiae KEX2 protease protein (Active)原裝、分裝9-單一去基米諾環(huán)素-d3