詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
外周血 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 圓形、梭形、多角形,形態(tài)多樣 | YS-01X8307 |
細胞簡介:
人外周血DC分離自外周血,由外周血單核細胞誘導(dǎo)而成的;外周血是除骨髓之外的血液,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,再在從血液中提取分離得到造血干細胞,我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未 成熟樹突狀細胞,典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長,在GM- CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,細胞大而形態(tài)不規(guī)則,表面皺褶多,亦可見少量短刺狀突,胞內(nèi)細胞器豐富并可見吞噬泡,具有較強的遷移能力,伴隨有部分未誘導(dǎo)成的單核細胞,貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經(jīng)TNFα、LPS等誘導(dǎo)而成,多數(shù)呈懸浮生長, 細胞呈圓形,細胞體積進一步增大,表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志,主要通過形態(tài)學(xué)、組合性細胞表面標志、在混合淋巴細胞反應(yīng)中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復(fù)合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子,進而激活T淋巴細胞,誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,處于啟動、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié);未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力,但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng) 答,不能激活T細胞的第二信號,可導(dǎo)致T細胞無能,從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低,一般在30%以下。
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂?。?/p>
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
方法簡介:
實驗室分離的人外周血未成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導(dǎo)而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的人外周血樹突狀(未成熟DC細胞)經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、 細 胞形態(tài)等綜合鑒定,純度可達80%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:半貼壁半懸浮
細胞形態(tài):圓形、梭形、多角形,形態(tài)多樣
傳代特性:屬于高度分化細胞;屬于不增殖細胞群
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
人外周血樹突狀(未成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
鹽酸甜菜堿 100g
Betaine,Hydrochloride 500g
BEZ235 (NVP-BEZ235) 50mg
BEZ235(NVP-BEZ235) 100mg
鴨γ干擾素(IFN-γ)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human neuronal nuclear aibody type 2 / ai Ri aibody (ANNA-2/Ri) ELISA Kit 人抗神經(jīng)元核抗體2型/抗Ri抗體(ANNA-2/Ri)試劑盒
Humanhemeoxygenase2,HO-2ELISAKit 人血紅素氧合酶2(HO-2)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforAChE(HumanAcetylcholinesterase)ELISAKit人乙酰酯酶
藥片抗壞血酸比色法定量試劑盒20次
MousePhospholipidaseA2,PL-A2ELISAKit小鼠0脂酶A2(PL-A2)試劑盒規(guī)格:96T/48T
NADH復(fù)合體1抗體
髓過氧化物酶抗體
OLR1重組大鼠 OLR1 / LOX1 蛋白 (Fc 標簽) Protein
EAAT3(Excitatory amino acid transporters 3 0.5mgEAAT3(Excitatory amino acid transporters 3) 膠質(zhì)細胞谷運載蛋白3抗原
SRPK3重組人 STK23 / MSSK1 / SRPK3 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
CANT1 Protein Human 重組人 CANT1 蛋白
CRP Protein Mouse 重組小鼠 CRP / C-Reactive 蛋白
EAAT3(Excitatory amino acid transporters 3 0.5mgEAAT3(Excitatory amino acid transporters 3) 膠質(zhì)細胞谷運載蛋白3抗原
CANT1 Protein Human 重組人 CANT1 蛋白
OLR1重組大鼠 OLR1 / LOX1 蛋白 (Fc 標簽) Protein
CRP Protein Mouse 重組小鼠 CRP / C-Reactive 蛋白
SRPK3重組人 STK23 / MSSK1 / SRPK3 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
人外周血樹突狀細胞(未成熟DC細胞)大鼠δ基乙酰脫水酶(ALAD)試劑盒 ,英文名: ALAD ELISA Kit
Rabbit ai neuophil granules aibody (ANGA) ELISA Kit 兔子抗中性粒細胞顆??贵w(ANGA)試劑盒
ELISA 小鼠巨噬細胞游走抑制因子(mouse MIF) 進口分裝
CLIAKitforIL-1sRI(Rabbitsolubleierleukin-1receptorI)ELISAKit兔子白介素1可溶性受體I
通用型辣椒輕斑駁病毒(PepperMildMottleVirus;PMMV)試劑盒20次
ELISAKitTM大鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白