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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
梭狀芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門(mén)的區(qū)域操作。
詳細(xì)介紹
梭狀芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Clostridium estertheticum PCR |
貨號(hào) | YS30587-R |
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽(yáng)性對(duì)照：有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。
（2）陰性對(duì)照：Ct值＞38或無(wú)Ct值，線形為直線或輕微斜線，無(wú)指數(shù)增長(zhǎng)期。
2.標(biāo)本結(jié)果判定：
（1）陽(yáng)性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期。
（2）可疑：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期，則判定為陽(yáng)性，否則為陰性。
（3）陰性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值＞38或無(wú)Ct值。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
下列是公司正在*的產(chǎn)品：
Hepatitis C Virus antibody原裝、分裝β-萘/2-萘/β-萘醋
Hepatitis C Virus antibody原裝、分裝固藍(lán)RR鹽/重氮堅(jiān)牢藍(lán)/堅(jiān)牢藍(lán)RR鹽
Hepatitis E Virus antibody原裝、分裝對(duì)基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷/PNPG
Hepatitis G Virus antibody原裝、分裝赤/赤GA3/赤霉/九二0
Adenovirus antibody原裝、分裝異玫瑰紅B/RBITC
p13 antibody [BM3]原裝、分裝羧基纖維素/羧基醚纖維素
Kappa light chain antibody [MEM-09]原裝、分裝3-吲哚/吲哚/生長(zhǎng)素/IAA
Bovine Papilloma Virus E2 antibody [5H4]原裝、分裝馬血清/大鼠血清/胎牛血清等各種血清
Cellubrevin antibody原裝、分裝神經(jīng)(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.0%(GC))
beta Dystroglycan antibody原裝、分裝十五(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC))
CIB1/KIP antibody原裝、分裝泛鈣一水合物(標(biāo)準(zhǔn)品)
Recombinant Toxoplasma gondii MIC 3 protein原裝、分裝山梨鉀(標(biāo)準(zhǔn)品)
Recombinant Toxoplasma gondii GRA 1 protein原裝、分裝全氟辛(分析標(biāo)準(zhǔn)品, 用于環(huán)境分析)
Recombinant EBV protein原裝、分裝正辛(分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.9%(GC))
Recombinant EBV p23 protein原裝、分裝(標(biāo)準(zhǔn)品)
梭狀芽孢桿菌PCR檢測(cè)試劑盒FATP1 antibody原裝、分裝Kemptamide
Recombinant Human HMGB1 protein (Tagged-His Tag)原裝、分裝肯普肽
Recombinant VP16 protein原裝、分裝肯普肽負(fù)控制
Recombinant S. cerevisiae GAL4 protein原裝、分裝內(nèi)酯抵抗肽MRFFV
Recombinant human STAT2 protein原裝、分裝角質(zhì)3細(xì)胞生長(zhǎng)子受體肽
Recombinant Human POLR2I protein原裝、分裝胰島素激酶結(jié)構(gòu)域受體（1）
Recombinant Human Thyroid Hormone Receptor alpha 1 protein原裝、分裝胰島素激酶結(jié)構(gòu)域受體（2）
Recombinant Human POLR2E/rpb5 protein原裝、分裝胰島素激酶結(jié)構(gòu)域受體（3）
CGRP antibody [4901]原裝、分裝胰島素激酶結(jié)構(gòu)域受體（4）