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產(chǎn)品簡介
陰溝腸桿菌PCR檢測試劑盒說明書運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。
詳細介紹
陰溝腸桿菌PCR檢測試劑盒說明書原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Enterobacter cloacaePCR |
貨號 | YS30705-R |
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽性對照：有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。
（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長期。
2.標本結(jié)果判定：
（1）陽性：標本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
（2）可疑：標本檢測結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi)。此時應(yīng)對標本進行重復(fù)檢測，如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長期，則判定為陽性，否則為陰性。
（3）陰性：標本檢測結(jié)果Ct值＞38或無Ct值。
PCR實驗步驟:
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴增。
其主要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
下列是公司正在*的產(chǎn)品：
MAP2 antibody原裝、分裝紡織品中增塑標準品88-99-3
E. coli Positive Control (Escherichia coli ) Whole Cell Lysate原裝、分裝鹽類增塑512-56-1、115-86-6
Eph receptor A4/SEK antibody原裝、分裝鄰苯二類鄰苯二二基己基酯標準品
Eph receptor A5/BSK antibody原裝、分裝檸檬酰基三-n-基酯77-90-7
RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS (phospho S5) antibody [8A7]原裝、分裝油酯142-77-8油酯112-62-9
KAT13A / SRC1 antibody原裝、分裝脂肪酯類增塑己二二正基酯
RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS (phospho S5) antibody [4H8] - ChIP Grade原裝、分裝氟對苯磺鹽FMTS114435-86-8
RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS (phospho S5) antibody [4H8] - ChIP Grade原裝、分裝生物試驗用(+/-)-甘草素標準品69097-97-8
Blooms Syndrome Protein Blm antibody [BFL-103]原裝、分裝七水鋅（ZnSO4 ?7H2O）7446-20-0Recombinant Rubellavirus C protein原裝、分裝ANS-Mg(=8-苯胺基-1-萘磺鎂)(>98.0%(HPLC)(T))
Recombinant SARS Nucleocapsid Protein原裝、分裝鈣黃綠素鈉鹽
Recombinant SARS spike glycoprotein原裝、分裝香豆素 102(>97.0%(HPLC)(N))
SOX14 antibody原裝、分裝香豆素 314(>98.0%(HPLC)(N))
Recombinant West Nile Virus preM protein原裝、分裝氯化熒光素(>90.0%(HPLC))
Recombinant Hepatitis D Virus protein原裝、分裝氯化熒光素(>90.0%(HPLC))
ENL antibody原裝、分裝2',7'-二氯熒光素(>95.0%(HPLC))
Recombinant HIV1 gp120 + gp41 protein原裝、分裝2',7'-二氯熒光素(>95.0%(HPLC))
Recombinant HIV1 p24 protein原裝、分裝2,3-二氨基萘(>98.0%(GC)(T))
陰溝腸桿菌PCR檢測試劑盒說明書Recombinant human STK23 protein原裝、分裝2×HotMaster Taq PCR MasterMix（不含染料）
Recombinant human STK23 protein原裝、分裝2×Long Taq PCR Master Mix（含染料）
Pit1 antibody原裝、分裝2×Long Taq PCR Master Mix（含染料）
SHOX antibody原裝、分裝2×Long Taq PCR Master Mix（不含染料）
Recombinant human MSK1 protein原裝、分裝2×Long Taq PCR Master Mix（不含染料）
Recombinant human MSK1 protein原裝、分裝TUREscript H Minus M-MuLV Reverse Transcriptase （反轉(zhuǎn)錄酶）
Recombinant human Met (c-Met) protein原裝、分裝TUREscript H Minus M-MuLV Reverse Transcriptase （反轉(zhuǎn)錄酶）
Recombinant human Met (c-Met) protein原裝、分裝TUREscript H Minus M-MuLV Reverse Transcriptase （反轉(zhuǎn)錄酶）
EPS15 antibody原裝、分裝THERMOscript H Minus M-MuLV Reverse Transcriptase（耐熱反轉(zhuǎn)錄酶）