詳細介紹
比氏腸微孢蟲PCR檢測試劑盒說明書特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Enterocytozoon bieneusi PCR |
貨號 | YS30713-R |
原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽性對照:有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。
(2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。
2.標本結(jié)果判定:
(1)陽性:標本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
(2)可疑:標本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時應(yīng)對標本進行重復(fù)檢測,如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。
(3)陰性:標本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。
PCR實驗步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴增。
其主要步驟是:
將待擴增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合,兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因為模板從5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補鏈。
下列是公司正在*的產(chǎn)品:
PDE6 alpha antibody原裝、分裝用于蔗糖57-50-1二水海藻糖 6138-23-4
PDE6 alpha antibody原裝、分裝L-γ-谷氨酰-L-纈氨酰-甘氨標準品
Met (c-Met) (phospho Y1230 + Y1234 + Y1235) antibody原裝、分裝性酶定量檢測試盒
PDE6 beta/PDE6B antibody原裝、分裝新橙皮甙、異槲皮苷、異鼠李素標準品
PDE6 gamma antibody原裝、分裝沒食子兒茶素、表沒食子兒茶素標準品
PDE6D antibody原裝、分裝膽固醇定量檢測試盒
SNAP25 antibody原裝、分裝游離脂肪定量檢測試盒
FE65 antibody - ChIP Grade原裝、分裝肌氨酐定量檢測試盒
BACE2 antibody原裝、分裝葡萄糖定量檢測試盒MED13/GCT antibody原裝、分裝1,6-二氨基己-N,N,N',N'-四(>98.0%(T))
Thrombin antibody (Biotin)原裝、分裝1,6-二氨基己-N,N,N',N'-四(>98.0%(T))
HSV2 antibody [12.3.4 and 1.1.1]原裝、分裝二烯基三胺基五二酐(>98.0%(T))
Thyroglobulin antibody (Biotin)原裝、分裝二烯基三胺基五二酐(>98.0%(T))
Thyroxine Binding Globulin antibody (Biotin)原裝、分裝二胺四二二鉀二水合物(>98.0%(T))
Tissue Factor antibody (Biotin)原裝、分裝二胺四二二鉀二水合物(>98.0%(T))
Urokinase antibody (Biotin)原裝、分裝二胺-N,N'-二基-N,N'-二水合物(>98.0%(T))
AcV5 tag antibody [AcV5]原裝、分裝N,N,N',N'-二胺四(亞基膦)水合物(>98.0%(T))
ACTH antibody [M31241]原裝、分裝N,N,N',N'-二胺四(亞基膦)水合物(>98.0%(T))
比氏腸微孢蟲PCR檢測試劑盒說明書PDX1 antibody [OTI2A12]原裝、分裝1kb Plus DNA Ladder Marker
KMT6 / EZH2 (phospho S21) antibody原裝、分裝1kb Plus DNA Ladder Marker
SOX17 antibody [OTI3B10]原裝、分裝1kb Plus DNA Ladder Marker
MAPK6/ERK-3 antibody [OTI5E1]原裝、分裝Zero Background pTOPO-TA Cloning Kit(零背景pTOPO-TA克隆試盒)
IL-8 antibody原裝、分裝Zero Background pTOPO-TA Cloning Kit(零背景pTOPO-TA克隆試盒)
53BP2/ASPP2/BBP antibody原裝、分裝Zero Background pTOPO-TA Simple Cloning Kit(零背景pTOPO-TA Simple克隆試盒/不含多克隆酶切位點MCS)
Recombinant mouse Interferon beta protein原裝、分裝Zero Background pTOPO-TA Simple Cloning Kit(零背景pTOPO-TA Simple克隆試盒/不含多克隆酶切位點MCS)
WDR45L antibody原裝、分裝Zero Background pTOPO-Blunt Cloning Kit(零背景pTOPO-Blunt平末端克隆試盒)
Polymyxin B peptide原裝、分裝Zero Background pTOPO-Blunt Cloning Kit(零背景pTOPO-Blunt平末端克隆試盒)
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。