詳細介紹
相對定量分析方法 :
2-ΔΔCt
前提:目標序列和內參序列的擴增效率接近100%且偏差在5%以內
1、用內參基因的CT值歸一目標基因的CT值:
ΔCT(test)= CT(target,test)-CT(ref,test)
ΔCT(calibrator)= CT(target,calibrator)-CT(ref, calibrator)
2、用校準樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值:
ΔΔCT= ΔCT(test) - ΔCT(calibrator)
3、計算表達水平比率:
2 –ΔΔCT=表達量的比值
參數規(guī)格:
產品名稱:須毛癬菌PCR檢測試劑盒
英文名稱:Trichophyton mentagrophytesPCR
貨號:YS31558-R
產品規(guī)格:50T
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
使用方法:
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
具有下列特點:
1.根據 指標的保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。
2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個數量級,可以達到幾百拷貝/反應。
3.即開即用,用戶只需要提供樣品模板,操作簡單,定量準確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測,避免后續(xù)污染。
5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6.本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
需要自備的器材:
1.儀器:分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調移液器(2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
Goat IgG (Fc) - Isotype Control原裝、分裝對基苯(分析標準品,用于環(huán)境分析)
Mouse F(ab')2 IgG1, Kappa Monoclonal [15H6] (Allophycocyanin) - Isotype control原裝、分裝對基苯標準溶液(1000μg/ml,溶:醇)
Mouse F(ab')2 IgG1, Kappa Monoclonal [15H6] (Phycoerythrin) - Isotype Control原裝、分裝對基苯標準溶液(1.04mg/ml,基體:醇)
Mouse F(ab')2 IgG1, Kappa Monoclonal [15H6] (FITC) - Isotype Control原裝、分裝3-辛(Standard for GC, ≥99.5% (GC))
Goat F(ab')2 IgG FITC - Isotype Control原裝、分裝1-十八烯(標準品)
Goat F(ab')2 IgG Phycoerythrin - Isotype Control原裝、分裝辛胺(標準品)
Rabbit IgG (FITC) - Isotype Control原裝、分裝十八(標準品)
Rabbit IgG (Phycoerythrin) - Isotype Control原裝、分裝十八(標準品)
Rabbit F(ab')2 IgG (FITC) - Isotype Control原裝、分裝2-辛(標準品)Hsp27 antibody原裝、分裝β-淀粉樣蛋白(10-20)
Recombinant human Cyclophilin 40 protein原裝、分裝β-淀粉樣蛋白(10-35)
Recombinant E. coli fur protein原裝、分裝β-淀粉樣蛋白(11-22)
Recombinant Human TRAIL protein原裝、分裝β-淀粉樣蛋白(11-40)
Recombinant Human TRAIL protein原裝、分裝β-淀粉樣蛋白(12-20)
E. coli O157 antibody原裝、分裝β-淀粉樣蛋白(12-28)
E. coli O6 antibody原裝、分裝β-淀粉樣蛋白(12-28)- Cys
E. coli O78 antibody原裝、分裝β-淀粉樣蛋白(13-27)
E. coli O25 antibody原裝、分裝β-淀粉樣蛋白(15-21)
須毛癬菌PCR檢測試劑盒三狀腺原氨檢測試盒20mg
三官能酶亞基β,線粒體檢測試盒20mg
三角形四肽重復蛋白1檢測試盒20mg
色氨羥化酶檢測試盒20mg
色氨酰tRNA合成酶檢測試盒5mg
色素上皮衍生子檢測試盒1mg
殺肽檢測試盒10mg
殺性/通透性增加蛋白檢測試盒20mg
沙漠刺猬子檢測試盒20mg
注意事項:
1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應盡量避免反復凍融,否則會導致模板的降解,影響PCR效率。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶,影響實驗結果。
4. 建議擴增片段長度1 kb以內,以便擴增效率佳。
?5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。