昆蟲蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：26123

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡介：

昆蟲組織蛋白提取試劑盒適用于從各種昆蟲類細(xì)胞、組織中提取總蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內(nèi)完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用方便，從昆蟲類細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2. 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。

3. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4. 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

5. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。
該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

試劑盒以外自備試劑和儀器：
移液器、吸頭、離心機(jī)及離心管、渦旋振蕩器、冰箱，冰盒。

使用方法：

1. 提取液制備：每500μl冷的昆蟲蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制劑混合物，4μl蛋白穩(wěn)定劑，混勻后置冰上備用。

2. 取100mg昆蟲組織樣本剪碎①，加入昆蟲蛋白提取液。

3. 用勻漿機(jī)/勻漿器充分勻漿。也可用液氮研磨后加入蛋白提取液。

4. 將勻漿在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
【注】
(1)較低轉(zhuǎn)速保持提取液在晃動即可。
(2)沒有振蕩條件也可以不振蕩，保持靜置，稍微延長靜置時間，中間每隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

5. 在4℃，12000g條件下離心10分鐘。

6. 在上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到昆蟲總蛋白。

7. 將上述蛋白提取物定量②后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)③。
注：
①用液氮研磨的方法更佳，具體方法可以聯(lián)系本公司索取詳細(xì)資料。
②建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。
③蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

常見問題分析：

1. 蛋白濃度低？

處理部分組織樣本時可能沒有裂解*，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長提取液的處理時間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2. 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樘崛∫褐泻懈蓴_Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3. 提取時出現(xiàn)膠裝沉淀？

蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時會出現(xiàn)少量透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)即可；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NF-kappaB、p53等時，不必進(jìn)行超聲處理。

4. 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。

使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

5. Western實(shí)驗(yàn)內(nèi)參可以選用beta-actin、GAPDH、Tubμlin。

6. 更多蛋白提取常見問題分析等資料可以聯(lián)系本公司索取。

注意事項(xiàng)：

1. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

5. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

保存條件：

蛋白酶抑制劑-20℃保存；蛋白穩(wěn)定劑、蛋白提取液2-8℃保存。一年有效。