RKO人結(jié)腸腺癌細(xì)胞試劑盒
RKO人結(jié)腸腺癌細(xì)胞試劑盒
----尚恩生物 186278592O3----
RKO細(xì)胞是一個低分化的結(jié)腸癌細(xì)胞系。RKO細(xì)胞含有野生型p53,但缺乏人甲狀腺受體核受體(h-TRβ1)。RKO細(xì)胞的p53蛋白的水平高于RKO-E6細(xì)胞,RKO細(xì)胞是RKO-E6細(xì)胞和RKO-AS45-1細(xì)胞的親本細(xì)胞系。RKO細(xì)胞在裸鼠中成瘤,且在軟瓊脂中形成集落。
SKU: SNL-072
分類: 細(xì)胞系
標(biāo)簽: 人源細(xì)胞系
收錄: ATCC
培養(yǎng)基: EMEM
來源: 結(jié)腸腺癌
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱:人結(jié)腸腺癌細(xì)胞
細(xì)胞別稱:RKO
細(xì)胞貨號:SNL-072
細(xì)胞種屬:人
生長情況:貼壁
培養(yǎng)條件:EMEM(MEM+NEAA)+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境:air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
換液周期:2-3天
培養(yǎng)基體積:T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml
傳代比例:1:2-1:4(具體情況視細(xì)胞生長速度及密度決定)
傳代方法:1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基;
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細(xì)胞10-20s,吸走潤洗的PBS;
3.T25瓶加1ml左右胰M,輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰M鋪勻瓶底細(xì)胞層;
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化;
5.消化到細(xì)胞間隙變大,但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰M消化;
6.混勻細(xì)胞,900rpm離心3-5min,棄上清;
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞,均勻分到新的培養(yǎng)瓶里;
8.補足*培養(yǎng)基,將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng);
注意事項不同品牌胰M消化時間差別較大,注意嚴(yán)格控制消化時間
消化傳代細(xì)胞時吹打細(xì)胞注意盡量輕柔,不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方:92%FBS+8%DMSO(新手建議)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手建議);
凍存規(guī)格:200-300萬/ml,1ml每管
凍存方法:1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞;
2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管;
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存;沒有程序凍存盒的實驗室,加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜,第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性,若有異常,及時調(diào)整實驗方案