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l 細(xì)胞鑒定

種屬鑒定已通過

l 細(xì)胞來源

國家資源庫

l 細(xì)胞背景

此細(xì)胞來自3月齡雄性小鼠。此AML12（α小鼠肝臟12）細(xì)胞系由來自針對人TGFα的轉(zhuǎn)基因小鼠（CD1菌株，品系MT42）的肝細(xì)胞建立。通過電子顯微鏡觀察，這些細(xì)胞表現(xiàn)出典型的肝細(xì)胞特征，例如過氧化物酶體和膽小管樣結(jié)構(gòu)。AML12細(xì)胞保留表達(dá)血清（白蛋白，α1抗胰蛋白酶和轉(zhuǎn)鐵蛋白）和間隙連接（連接蛋白26和32）蛋白的高水平mRNA的能力，并且僅含有乳酸脫氫酶的同工酶5。細(xì)胞表達(dá)高水平的人TGFα和較低水平的小鼠TGFα。肝臟特異性蛋白質(zhì)的表達(dá)在培養(yǎng)中隨時間降低，但通過在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞而重新激活。細(xì)胞不會在軟瓊脂中形成菌落或生長。這些細(xì)胞在免疫抑制小鼠中沒有致瘤性。

l 細(xì)胞特性

1） 來源：小鼠，肝

2） 形態(tài)：上皮樣細(xì)胞 貼壁生長

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件：

1） 準(zhǔn)備：DMEM/F12 基礎(chǔ)培養(yǎng)基     (awcell-0005)                88%

     優(yōu)質(zhì)胎牛血清                                                                             10%

       ITS(胰島素+轉(zhuǎn)鐵蛋白+硒)    （awcell-4507）                     1%

       Dexamethasone  地塞米松（awcell-8040）                    40ng/ml

       P/S青霉素-鏈霉素                                                                      1%

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項：

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

l 運輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

常溫：（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全:

1. 所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。