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l 細胞鑒定

STR鑒定已通過

l 細胞來源

國家資源庫

l 細胞背景

該細胞是1970從一名69歲的白人女性轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的胸腔積液中分離建立的。該細胞保留了多個分化乳腺上皮的特性，包括：能通過胞質(zhì)雌激素受體加工雌二醇并能形成隆突結(jié)構(gòu)（domes）；該細胞表達WNT7B癌基因；TNF-α可以抑制MCF-7細胞的生長；抗雌激素處理能調(diào)節(jié)細胞胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白（IGFBP）的分泌。

l 培養(yǎng)條件：

1） 準備MEM（推薦awcell-0012）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；添加0.01mg/ml 胰島素；雙抗1%。2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項：

注意事項：

a. mcf-7 細胞一般情況下是生長緩慢的細胞系，前期呈島狀生長，隨著細胞生長，細胞會逐步變成扁平單層細胞。通常需要6-12天才能達到80%生長密度，如果生長速度比正常情況還要緩慢，可能需要換另外批次的血清，把血清濃度提高到20%也有助于改善細胞生長情況。

b. mcf-7細胞在復蘇和傳代后，會在培養(yǎng)基中觀察到成團的細胞漂浮物，對于這個細胞來說這是正常的情況，在復蘇和傳代后前三天可以靜置細胞不做處理，三天后貼壁情況會有所改善，但懸浮的細胞團仍會出現(xiàn)，這些懸浮的細胞是活細胞在換液和傳代時需要離心回收，這些懸浮細胞團可以通過使用移液器（5mL或者更?。﹣泶瞪?，重新打入到貼壁細胞培養(yǎng)瓶中。丟棄這些懸浮細胞會使細胞密度變低，細胞生長緩慢。

c. 使用0.25% (w/v) Trypsin - 0.53 mM EDTA 消化細胞。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

4）運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

l 運輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

常溫（2） T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。