病毒作為形態(tài)最微小,結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的微生物,和我們的日常生活緊密相連?,F(xiàn)在隨著科學(xué)的發(fā)展進(jìn)步,病毒也早已不只是致病源的代名詞,而是被開(kāi)發(fā)出了對(duì)人類(lèi)有益的用處。比如,噬菌體可以作為防治某些疾病的特效藥;在細(xì)胞過(guò)程中某些病毒可以作為細(xì)胞融合的助溶劑;在基因工程中病毒可以作為目的基因的載體,使之被拼接在目標(biāo)細(xì)胞的染色體上等等。
在病毒發(fā)揮這些功能的過(guò)程中,對(duì)病毒的質(zhì)量控制是非常重要的,這就需要對(duì)其進(jìn)行準(zhǔn)確高效的表征。目前常用的病毒表征方式主要有ELISA、RT-qPCR、TCID50等,主要檢測(cè)的是病毒的滴度,也就是病毒活力,以此確定病毒的感染能力。但這些方法有一個(gè)共同的缺點(diǎn),那就是耗時(shí)較長(zhǎng),其中用時(shí)最短的RT-qPCR也要花費(fèi)1-2小時(shí)。并且這些檢測(cè)方式無(wú)法得到在病毒的質(zhì)量控制中十分重要的兩項(xiàng)參數(shù)——病毒的粒徑和濃度。在實(shí)際應(yīng)用中,病毒的粒徑和濃度能為研究人員提供許多信息,比如粒徑較小的病毒可能有團(tuán)聚的風(fēng)險(xiǎn),濃度較高的病毒則往往代表了較高的感染效率等。
在介紹了這么多相關(guān)的理論知識(shí)之后,就讓我們來(lái)看一下納米庫(kù)爾特粒度儀在病毒質(zhì)量控制中的表現(xiàn)吧。俗話(huà)說(shuō),百聞不如一見(jiàn),相信這些實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)能讓讀者們有一個(gè)更直觀(guān)的印象。
這是使用納米庫(kù)爾特粒度儀分別對(duì)純化前后的病毒收獲液進(jìn)行測(cè)試所得的結(jié)果。
圖1:純化前、后的病毒收獲液測(cè)試結(jié)果
可以從圖上清晰地看出,純化前的病毒收獲液?jiǎn)畏稚⑿圆?,顆粒粒徑分布較寬,在70-140nm之間均有分布。而純化后的病毒收獲液具有較好的單分散性,顆粒粒徑分布較窄,集中在100-110nm之間。而且純化前后病毒收獲液中含量最高的顆粒粒徑也從70nm轉(zhuǎn)移到了110nm,表明在純化過(guò)程中粒徑較小的顆粒被除去,而粒徑在110nm左右的病毒顆粒被富集。
接下來(lái)讓我們看看存放溫度對(duì)病毒狀態(tài)的影響,這是使用納米庫(kù)爾特粒度儀對(duì)兩個(gè)在不同溫度下存放的病毒樣本進(jìn)行測(cè)試所得的結(jié)果。其中兩個(gè)病毒樣本出自同一批次,分別在4℃和37℃的條件下各存放12小時(shí)后取出測(cè)試。
圖2:在4℃、37℃下各存放12小時(shí)的病毒樣本測(cè)試結(jié)果
測(cè)試結(jié)果顯示,在37℃下存放的病毒樣本較在4℃下存放的病毒樣本而言,濃度下降,而且大顆粒增多,這就表明在前者在存放的過(guò)程中發(fā)生了團(tuán)聚,而這樣的團(tuán)聚對(duì)病毒產(chǎn)品的質(zhì)量會(huì)造成一定影響。
從上面的實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)中可以看出,納米庫(kù)爾特粒度儀在病毒的質(zhì)量控制,尤其是在對(duì)病毒的粒徑以及濃度的檢測(cè)中能夠發(fā)揮很大的作用,想必也能為今后病毒研究的發(fā)展助一份力。
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