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GJB2 基因組 DNA 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可作為測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)，用于 GJB2 基因突變定性、定量測(cè)量，方法確認(rèn)以及實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制。

一、樣品制備

本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是通過(guò)合成 GJB2 基因構(gòu)建在慢病毒載體上，轉(zhuǎn)染 293T 細(xì)胞基因組中，提取純化基因組 DNA，稀釋至一定濃度分裝。

二、溯源性及定值方法

采用絕對(duì)定量方法-數(shù)字 PCR 方法對(duì) GJB2 野生型、變型基因拷貝數(shù)濃度測(cè)定，計(jì)算突變型基因占野生與突變基因之和的百分比，得到標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值。通過(guò)使用滿足計(jì)量學(xué)特性要求、經(jīng)確認(rèn)的絕對(duì)定量測(cè)量方法和經(jīng)檢定校準(zhǔn)的容量計(jì)量器具，確保本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量值溯源至可作為任何一個(gè)量制基本單位的實(shí)體數(shù)基本單位“一"（符號(hào)：1）以及體積的國(guó)家法定計(jì)量單位升（L）。

三、均勻性和穩(wěn)定性評(píng)估

參照 JJF1343 國(guó)家計(jì)量技術(shù)規(guī)范（等效 ISO 指南 35），采用數(shù)字 PCR 方法對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)研究，最小取樣量 5 μL，結(jié)果表明均勻性良好。按照先密后疏的原則采用數(shù)字 PCR 方法對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行穩(wěn)定性考察研究，標(biāo)準(zhǔn)值無(wú)方向性變化并通過(guò)平均值一致性檢驗(yàn)，表明穩(wěn)定性良好。本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)自定值日期起，有效期為 5 年，研制單位將繼續(xù)跟蹤監(jiān)測(cè)該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性，有效期內(nèi)如發(fā)現(xiàn)量值變化，將及時(shí)通知用戶。

四、包裝、儲(chǔ)存及使用

1.包裝規(guī)格：本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用 0.5 mL 帶內(nèi)蓋彩色凍存管包裝，每管 50 μL。

2.保存及運(yùn)輸條件：置于-70℃冰箱中保存。采用冰袋運(yùn)輸。

3.使用注意事項(xiàng)：使用前應(yīng)先從冰箱內(nèi)取出，平衡至室溫后混勻使用。

4.本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可用于下級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的量值的傳遞。