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多重組合靈活應(yīng)用 | 看安捷倫 N 糖樣品前處理如何助力糖基化檢測
糖基化是生物治療蛋白的一種重要的翻譯后修飾過程。糖基化生物功能的重要性以及分析檢測技術(shù)手段的不斷提升，使得糖基化分析逐步從表征方法向工藝監(jiān)控和放行檢測方面拓展，2020 版藥典增加單抗的 N- 糖檢測標(biāo)志著糖基化檢測將在生物制藥行業(yè)得到越來越深入的研究，并且廣泛應(yīng)用以確保生物治療蛋白的安全性和有效性。在此背景下，許多實驗室希望能夠獲得一套完整而靈活、流程化和模塊化操作的方案。
常見的 N- 糖表征方法包括酶促游離多聚糖的標(biāo)記，以實現(xiàn)熒光檢測（FLD）并增強質(zhì)譜（MS）的電離。這些標(biāo)記的多聚糖由液相色譜（LC） ，借助 FLD 進(jìn)行相對定量分析，利用 MS 檢測進(jìn)行質(zhì)量測定。親水相互作用液相色譜（HILIC）是標(biāo)記 N- 糖常用的分離技術(shù)。
安捷倫現(xiàn)提供幾種靈活而模塊化樣前處理選項來支持您的 N 糖檢測，囊括了三代糖處理技術(shù)手段，包括：
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最新產(chǎn)品 Gly-X。該產(chǎn)品可將樣品前處理時間縮短至 1 小時，采用 5 分鐘的 PNGase F 酶解以及具有高 FLD 和 MS 信號的糖胺標(biāo)記染料 InstantPC。另外可用 2-AB 和 APTS 進(jìn)行標(biāo)記，工作流程時間約為 2 小時
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離心型試劑盒 GlykoPrep。該產(chǎn)品基于 2012 年推出的 AssayMAP 小柱，工作流程時間為 3–5 小時
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用于傳統(tǒng) 2-AB 標(biāo)記方法的產(chǎn)品
安捷倫針對不同的應(yīng)用場景，為您提供了幾種可用于 N-糖樣品前處理的組合選項。
套裝一
藥典 2-AB 標(biāo)記方法的產(chǎn)品便捷經(jīng)濟(jì)標(biāo)準(zhǔn)版：
傳統(tǒng)標(biāo)記法的產(chǎn)品組合更經(jīng)濟(jì)，特別適合于樣品通量不高的客戶。傳統(tǒng)的前處理工作流程包括使用 PNGase F 在天然或變性條件下的酶解、游離多聚糖純化、熒光標(biāo)記以及純化標(biāo)記的多聚糖。安捷倫有完善的一站式產(chǎn)品供應(yīng)服務(wù)，提供整個流程中需要的高質(zhì)量的試劑組分。
套裝二
藥典 2-AB 標(biāo)記快速高效升級版：
使用 2-AB（2-氨基苯甲酰胺）生成標(biāo)記的 N-糖數(shù)據(jù)已有 20 多年的歷史，在許多實驗室中均得到了良好的應(yīng)用。AdvanceBio Gly-X（原 ProZyme）是新一代的 N-糖樣品前處理技術(shù)。通過酶促反應(yīng)快速（5 分鐘）釋放 N-糖，并用還原胺化染料進(jìn)行標(biāo)記。傳統(tǒng)上，使用 2-AB 標(biāo)記要求在標(biāo)記反應(yīng)前對樣品進(jìn)行干燥處理，而使用 Gly-X 2-AB Express 基質(zhì)上標(biāo)記則無需進(jìn)行該步驟。樣品前處理時間：約 2 小時。
套裝三
InstantPC 標(biāo)記快速高靈敏增強版：
Gly-X N-糖樣品前處理工作流程可在 5 分鐘內(nèi)釋放 N-糖，使用 InstantPC 進(jìn)行即時糖胺標(biāo)記，InstantPC 標(biāo)記的多聚糖在正離子模式下顯示出了更高的 FLD 信號和更高的 MS 電離效率，從而能夠可靠地檢測低豐度的多聚糖種類。
多聚糖標(biāo)記的 FLD（A）和 MS（B）響應(yīng)對比。
套裝四
寡糖深度表征糖苷酶以及標(biāo)準(zhǔn)品套裝專業(yè)版：
寡糖的深度表征需要采用“化整為零"的方式研究糖的結(jié)構(gòu)，安捷提供用于研究的各種內(nèi)切糖苷酶和外切糖苷酶，能夠更清晰地呈現(xiàn)糖的結(jié)構(gòu)。內(nèi)切糖苷酶可將寡糖從糖蛋白及其他底物中釋放出來。這些酶可用于糖蛋白的去糖基化以分析。外切糖苷酶是一種糖苷水解酶，可酶解末端殘基的糖苷鍵。這些酶可用于研究游離的多聚糖、糖脂和糖蛋白，針對特定結(jié)合位點的外切糖苷酶也可用于寡糖的測序。
我們?yōu)槟?strong style="margin: 0px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box; overflow-wrap: break-word !important;">提供已標(biāo)記的多聚糖標(biāo)準(zhǔn)品。支持 InstantPC、2-AB、2-AA 和 APTS 標(biāo)記物，均可用于 LC/FLD、LC/MS、CE/LIF 和 CE/MS 等流程的定性工作。這些標(biāo)準(zhǔn)品涵蓋了包括復(fù)雜二天線中性型與唾液酸化型、高甘露糖型以及 α-Gal 型的多種常見多聚糖類型。此外，我們還提供糖蛋白的多糖混標(biāo)，如：人 IgG，牛 RNA 酶 B，牛胎球蛋白，人 α1-酸糖蛋白（AGP）， 中國倉鼠卵巢（CHO）細(xì)胞產(chǎn)生的重組單克隆 IgG（mAb）， 三天線和四天線唾液酸化 N- 糖混標(biāo)。
