多肽藥物的發(fā)展由來已久，也是目前新藥研發(fā)領域備受矚目的熱門方向，包含合成多肽和重組多肽產(chǎn)品。大多數(shù)多肽藥物通過固相多肽合成法進行生產(chǎn)?；瘜W合成多肽相關雜質可能來自原輔料、生產(chǎn)過程，或者在生產(chǎn)或儲存過程中因降解而產(chǎn)生。

隨著多肽藥物研究技術的提高和相關法規(guī)的完善，藥審中心于今年 2 月發(fā)布了《化學合成多肽藥物藥學研究技術指導原則（試行）》^[1]，提出化學合成多肽藥物藥學研究的一般性技術要求。尤其在指導原則中制定了肽相關雜質的報告限、鑒定限和質控限，使得多肽有關物質的分離得到了更高的關注。肽相關雜質由于與目標分子結構相關，因此在日常方法開發(fā)過程中通常有著極大的挑戰(zhàn)。

增強型方法提供了一套系統(tǒng)的方法來開發(fā)和完善分析方法，開發(fā)流程會考慮多個變量（因素）之間的相互影響。通過增強型方法可以建立穩(wěn)定耐用的多肽雜質分析方法（ICH Q14，Enhanced Approach）^[2]。利用 Agilent 方法開發(fā)系統(tǒng)，有助于進行多肽有關物質分析的多因素多變量分析方法開發(fā)。

在方法篩選時，首先利用色譜柱選擇性和流動相選擇性差異，組合進行方法初篩，確定初步方法。針對多肽：建議初始有機相流動相為乙腈，流動相 B 必要時從乙腈換成甲醇或乙腈甲醇混合；三氟乙酸（TFA）因為可以抑制色譜柱固定相硅膠表面的硅醇基，改善分離，所以 0.1% TFA 水溶液作為水相流動相而常見。隨著色譜柱封端技術的成熟，流動相 A 必要時也可考慮緩沖鹽體系，同時對鹽類型和濃度進行進一步優(yōu)化。初始方法確定后，再對溫度和梯度的進行組合優(yōu)化，必要時再進行 pH 的精細篩選。

從上述方法開發(fā)工作流程可以看出，色譜柱選擇性會極大程度影響到初步方法的確定。因此一個合適的色譜柱組合可幫助簡化方法開發(fā)。我們列出了日常安捷倫工程師在實驗方法開發(fā)過程中所涉及的色譜柱組合。這些精心挑選過的色譜柱，可以支持多肽客戶在日常大部分有關物質方法開發(fā)中的工作。安捷倫色譜柱按照行業(yè)嚴格的質量控制規(guī)范制造而成，具有可重現(xiàn)的可靠性能。