皖儀科技離子色譜農(nóng)藥檢測應(yīng)用方案
引言
氨基寡糖素，是一種農(nóng)業(yè)專用的殼聚糖，一種以β-1,4-糖苷鍵連接而成的低聚殼聚糖，一般含有 2-10 個氨基葡萄糖。它是從海洋生物如蝦類、蟹類的外殼提取而來，是天然糖中唯一大量存在的、堿性的氨基寡糖，具有水溶性好、安全無毒、易吸收等特點。與傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥不同，氨基寡糖素作為一種植物免疫誘抗劑，直接作用于植物，使植物獲得抗逆病蟲和增產(chǎn)的作用，可運用在果樹、煙草、蔬菜等糧食作物。作為一種新型的生物綠色農(nóng)藥，氨基寡糖素具有高效、低成本、環(huán)境相容性好、安全性高等特點，對我國農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。
目前測定氨基寡糖素含量的方法有分光光度法、離子色譜法。分光光度法，由于氨基寡糖素本身沒有發(fā)色團(tuán)，紫外吸收十分弱，樣品處理時需衍生，操作繁瑣，且衍生后樣品溶液不穩(wěn)定，溶液吸光度會隨著時間的變化而變化，數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性差等問題，因此這一方法應(yīng)用受到限制。離子色譜法，被用作為仲裁法，配置安培檢測器，可方便、快速完成游離氨基寡糖素和氨基寡糖素總量的測定，具有重要意義。本文將介紹皖儀科技離子色譜儀搭配安培檢測器在氨基寡糖素測試方面的應(yīng)用，以供參考。
1 實驗方法
1.1 色譜條件儀器：
皖儀科技IC6300系列離子色譜；
n 1.1.1鑒別試驗/游離氨基葡萄糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定
分析柱：糖分析專用柱（4×250mm）
保護(hù)柱：糖分析專用柱（4×50mm）
淋洗液：氫氧化鈉與乙酸鈉鹽溶液
進(jìn)樣量：25μL
柱溫：30℃
檢測模式：積分脈沖—金電極 糖類 四電位
n 1.1.2 氨基寡糖素質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定
分析柱：糖分析專用柱（4×250mm）
保護(hù)柱：糖分析專用柱（4×50mm）
淋洗液：氫氧化鈉與乙酸鈉鹽溶液
進(jìn)樣量：25μL
柱溫：30℃
檢測模式：積分脈沖—金電極 糖類 四電位
1.2 試劑及實驗材料
D-氨基葡萄糖鹽酸鹽（≥99%）；
50%氫氧化鈉溶液（分析級）；
無水乙酸鈉（≥99.9%）；
一次性注射器（0.5-2mL）；
水系針式過濾器（0.22μm）；
去離子水，18.25兆歐；
鹽酸（優(yōu)級純）氫氧化鈉（99.9%）
1.3 樣品前處理
n 1.3.1 鑒別試驗/游離氨基葡萄糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)的測定
標(biāo)準(zhǔn)品測試：準(zhǔn)確稱取30mg（精確至0.0001g）質(zhì)量的D-氨基葡萄糖鹽酸鹽，置于100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，超聲震蕩5min。冷卻至室溫，搖勻。移取上述溶液1.0mL于100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。配置好的樣品按照1.1.1色譜條件進(jìn)行測定。
樣品測試：精密稱取樣品約120mg（精確至0.0001g）于200mL容量瓶，用水稀釋至刻度，超聲震蕩5min，隨后將樣品稀釋十倍，過0.22μm濾膜后進(jìn)樣分析。配置好的樣品按照1.1.1色譜條件進(jìn)行測定。
n 1.3.2 氨基寡糖素質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定
標(biāo)準(zhǔn)品測試：準(zhǔn)確稱取30mg質(zhì)量的D-氨基葡萄糖鹽酸鹽（精確至0.0001g），置于100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，超聲震蕩5min。冷卻至室溫，搖勻。移取上述溶液5.0mL于100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。配置好的樣品按照1.1.2色譜條件進(jìn)行測定。
樣品測試：精密稱取樣品約30mg（精確至0.0001g）于耐壓燒瓶，加入10mL 8mol/L的鹽酸溶液，充分混勻后充入高純氮氣并密封，98℃由于下攪拌8h。冷卻至室溫，打開后，緩慢加入8mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)水解液的pH值到7.0。再將水解液轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，超聲震蕩5min，冷卻至室溫，搖勻。用移液管移取上述溶液5.0mL至100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，過0.22μm濾膜后直接進(jìn)樣分析。配置好的樣品按照1.1.2色譜條件進(jìn)行測定。
2 測試結(jié)果
2.1 鑒別試驗/游離氨基葡萄糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)
n 2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)品/樣品測試
由于氨基寡糖素中主要對植物起作用的是低聚寡糖，在鑒別試驗中，氨基寡糖素需至少含有殼二糖至殼六糖中的兩個或者多個，且氨基葡萄糖含量不可超過一定數(shù)值，否則將被判定為不合格產(chǎn)品。因此鑒別實驗需將氨基葡萄糖與殼二糖至殼六糖分離。但由于各個殼寡糖之間性質(zhì)較為相似，分離難度較大。
本次試驗中，我們將殼二-殼七糖與氨基葡萄糖混合標(biāo)準(zhǔn)品，以及樣品按照“1.1.1"色譜條件進(jìn)行測試，其測試譜圖如圖1所示。標(biāo)準(zhǔn)品與樣品中氨基葡萄糖與殼二糖、殼三糖、殼四糖、殼五糖、殼六糖、殼七糖標(biāo)準(zhǔn)品分離度良好。并且在樣品中檢測出殼二糖、殼三糖、殼四糖、殼五糖、殼六糖、殼七糖六種糖。且本次測試樣品中游離氨基葡萄糖測試含量為0.3%，低于標(biāo)準(zhǔn)的限定要求0.5%，為合格樣品。
圖1 殼二-殼七糖與氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品分離測試譜圖
圖2 樣品測試譜圖
n 2.1.2 重復(fù)性測試
按照“1.1.1"色譜條件，將氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品連續(xù)進(jìn)6針，得到的色譜圖和重復(fù)性數(shù)據(jù)分別見圖3、表1，結(jié)果表明，定性和定量重復(fù)性數(shù)據(jù)良好。
圖3 氨基葡萄糖重復(fù)性測試譜圖
表1 氨基葡萄糖重復(fù)性測試數(shù)據(jù)
2.2 氨基寡糖素質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定
n 2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品/樣品測試
將氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品與處理好的樣品（處理方法見1.3.2）按照“1.1.2"色譜條件進(jìn)行測試，結(jié)果見圖4、圖5。經(jīng)計算，氨基寡糖素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為97%，高于最低限度90%，高于標(biāo)準(zhǔn)要求，為合格樣品。
圖4 氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品測試譜圖
圖5 樣品測試譜圖
n 2.2.2 重復(fù)性測試
按照“1.1.2"色譜條件，將氨基葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品連續(xù)進(jìn)6針，得到的色譜圖和重復(fù)性數(shù)據(jù)分別見圖6、表2，結(jié)果表明，保留時間和峰面積重復(fù)性數(shù)據(jù)良好。
圖6 氨基葡萄糖重復(fù)性測試譜圖
表2氨基葡萄糖重復(fù)性測試數(shù)據(jù)
3 總結(jié)
本文采用皖儀科技離子色譜6300系列配置安培檢測器，對游離氨基寡糖素和氨基寡糖素總量的測定，測試結(jié)果良好，準(zhǔn)確性高，完全滿足離子色譜法檢測氨基寡糖素的測試要求。
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