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皖儀科技液相色譜對阿維菌素B1a的檢測

前言

2015年，日本科學(xué)家大村智、愛爾蘭科學(xué)家威廉·坎貝爾因研發(fā)抗寄生蟲特效藥物阿維菌素和伊維菌素做出的巨大貢獻(xiàn)，獲得了當(dāng)年度的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎，這充分說明了阿維菌素在人類生產(chǎn)生活中的重要作用。

阿維菌素憑借其高效、光譜、高選擇性的優(yōu)點(diǎn)，不僅應(yīng)用于防治果樹、蔬菜、糧食等作物的葉螨、癭螨、茶黃螨和各種抗性蚜蟲，也廣泛應(yīng)用于殺滅魚、蝦等養(yǎng)殖水體和魚體體表寄生的錨頭鳋、中華鳋等寄生蟲及松藻蟲、水蜈蚣等水生昆蟲。但阿維菌素易殘留于水果和蔬菜等生物樣本中，當(dāng)人長期食用含有阿維菌素農(nóng)藥殘留的食物后，當(dāng)阿維菌素殘留濃度達(dá)到一定量后，就會對人體的神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生毒性作用，表現(xiàn)為四肢無力、肌肉震顫、抽搐和胃腸道反應(yīng)，如惡心、嘔吐、腹瀉等。嚴(yán)重者還會出現(xiàn)對心臟的損害，如心律失常、心力衰竭等。所以，對阿維菌素殘留量的檢測很有必要。天然阿維菌素中含有8個組分，主要有4種即A1a、A2a、B1a和B2a，對應(yīng)的4個比例較小的同系物是A1b、A2b、B1b和B2b。市售阿維菌素農(nóng)藥是以阿維菌素B1a為主要?dú)⑾x成分，以阿維菌素B1a的含量來標(biāo)定。

本篇文章參考了《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)》GB23200.19-2016水果和蔬菜中阿維菌素殘留量的測定 高效液相色譜法條件，采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置紫外檢測器進(jìn)行檢測。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，阿維菌素的線性良好，R值在0.999以上，阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰正常，理論塔板數(shù)在4500以上。阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品重復(fù)進(jìn)樣6次，定性RSD值為0.100%，定量RSD值為0.305%，重復(fù)性較好。最低檢出限為3.4μg/L。說明了該方法配備皖儀科技LC3200系列儀器滿足阿維菌素的檢測需求。

1    實(shí)驗(yàn)方法

1.1  儀器配置

表1 高效液相色譜系統(tǒng)配置清單

1.2 測試條件

液相色譜條件

流動相：甲醇：水=89:11；

色譜柱：諾譜 Nova Atom SC18色譜柱,4.6×150mm；

柱溫：40℃；

流速：1.0 mL/min；

進(jìn)樣量：20μL；

檢測波長：245nm。

1.3 試劑及實(shí)驗(yàn)材料

甲醇：色譜純；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品：(1000μg/mL in Methanol)；超聲波清洗機(jī)。

1.4 溶液配制

1.4.1 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)工作液   

根據(jù)需要移取適量的阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品溶液（1000μg/mL），用甲醇稀釋成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。標(biāo)準(zhǔn)工作液需每周配制一次。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液

用甲醇對阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品溶液（1000 μg/mL）進(jìn)行稀釋，配制質(zhì)量濃度為0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，使用前取20μl注入色譜儀。

2    結(jié)果與討論

2.1 系統(tǒng)適用性

圖1 單進(jìn)甲醇溶劑色譜圖

圖2 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

表2 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品色譜參數(shù)

說明：由上述譜圖可見，阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰正常，保留時間為5.360 min，理論塔板數(shù)為4500以上。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖3 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)

說明：本次測試的阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)工作曲線濃度為0.025μg/mL、0.05μg/mL、0.10μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL。阿維霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍較好，線性相關(guān)系數(shù)＞0.999，滿足實(shí)驗(yàn)分析需求。

2.3 重復(fù)性

圖4 阿維霉素標(biāo)準(zhǔn)品重復(fù)性實(shí)驗(yàn)色譜圖

表3 阿維霉素標(biāo)準(zhǔn)品色譜參數(shù)

說明：阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品重復(fù)進(jìn)樣6次，保留時間RSD值為0.100%，峰面積RSD值為0.305%，重復(fù)性較好。

2.4 檢出限

圖5 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

表4 阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品色譜參數(shù)及檢出限

說明：結(jié)果表明使用配備皖儀科技LC3200系列儀器檢測阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品的檢測限為3.4μg/L。

3 結(jié)論

本次采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置紫外檢測器，依據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)》GB23200.19-2016水果和蔬菜中阿維菌素殘留量的測定 高效液相色譜法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，阿維菌素的線性良好，R值在0.999以上，阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰正常，理論塔板數(shù)在4500以上。阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品重復(fù)進(jìn)樣6次，定性RSD值為0.100%，定量RSD值為0.305%，重復(fù)性較好。最低檢出限為3.4μg/L。說明了該方法配備皖儀科技LC3200系列儀器滿足阿維菌素的檢測需求。