腺相關(guān)病毒(adeno-associatedvirus,AAV),也稱腺伴隨病毒,屬于微小病毒科依賴病毒屬,是目前發(fā)現(xiàn)的一類結(jié)構(gòu)最jian單的單鏈DNA缺陷型病毒,需要輔助病毒(通常為腺病毒)參與復(fù)制。那么想要真正準(zhǔn)確可靠地檢測腺相關(guān)病毒(AAV)滴度該怎么辦呢?讓我們一起來看看吧!
AAV基因組為4.8kb的線狀單鏈DNA;AAV免疫原性低,基因持續(xù)表達半年以上;AAV具有多種血清型,可以特異性靶向感染不同的組織或器官,是動物活體基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的shou選工具!
腺相關(guān)病毒血清型眾多(12種),不同血清型對不同組織親和性不同。如何選擇呢?
通過病毒載體傳遞基因的一個特殊挑戰(zhàn)是病毒滴度的精確測量。傳統(tǒng)上,AAV顆粒是用DNA斑點雜交或類似的方法來測量的。這些方法非常耗時,并且具有很高的測量間可變性。對于高純度的病毒樣品,260nm處的吸光度用于估計病毒顆粒的總數(shù)。
但是,這種方法不能用于未純化的病毒上清液,因為它含有其他成分,將導(dǎo)致吸光度為260nm。用只與AAV完整顆粒反應(yīng)的抗體建立ELISA方法;然而,該方法測量所有AAV顆粒,包括那些缺乏基因組DNA的顆粒。
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