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          如何提高電轉(zhuǎn)效率?

          閱讀:750      發(fā)布時(shí)間:2023-9-14
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          電轉(zhuǎn),也稱電穿孔法,是通過脈沖電流在細(xì)胞膜上打孔,將外源分子(DNA、RNA mRNA等)導(dǎo)入真核細(xì)胞內(nèi),來改變細(xì)胞的特性,從而達(dá)到改造細(xì)胞的目的,是實(shí)現(xiàn)細(xì)胞基因功能和蛋白質(zhì)表達(dá)研究的重要工具。那么該如何提高電轉(zhuǎn)效率呢?讓我們一起來看看吧!

          一、細(xì)胞收集時(shí):

          1)在消化貼壁細(xì)胞時(shí),一定要注意終止胰酶反應(yīng),防止過度消化;最好使用專業(yè)的胰酶中和劑;

          2)在進(jìn)行細(xì)胞離心時(shí),使用低轉(zhuǎn)速長時(shí)間離心,提升細(xì)胞的存活率;

          3)選擇合適狀態(tài)的細(xì)胞,一般原代細(xì)胞可以傳1-2次后使用;盡量挑選迭代次數(shù)少的細(xì)胞,如果是凍存細(xì)胞,建議復(fù)蘇1-2h后使用;

          4)選擇對數(shù)增長期的細(xì)胞;

          5)做好支原體清除。

          二、試劑添加:

          1)電轉(zhuǎn)試劑的添加只需室溫操作即可;

          2)細(xì)胞在試劑中停留不超20min,混合好盡快開始實(shí)驗(yàn);

          3)轉(zhuǎn)染的底物占比不能大于總體積的10%,比如轉(zhuǎn)染體系100ul,底物最多添加10ul;

          4)在消化的細(xì)胞進(jìn)行配置時(shí),一定要離心并完quan去除殘留培養(yǎng)基;

          5)在加入到電極杯中時(shí),要避免產(chǎn)生氣泡,從而影響電脈沖;

          6)對底物進(jìn)行內(nèi)毒素控制;

          7)轉(zhuǎn)染試劑與底物濃度配比控制;

          8)如果是mRNA轉(zhuǎn)染,可多洗滌2次。

          三、程序設(shè)置:

          1)使用電轉(zhuǎn)儀,程序已經(jīng)設(shè)定好,可以根據(jù)不同的細(xì)胞名稱,選擇對應(yīng)的最you程序;根據(jù)實(shí)際情況,可以對程序進(jìn)行微調(diào),確保轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞存活率。

          2)使用需要自行設(shè)置的儀器,一般電場強(qiáng)度設(shè)置遵循低電場、長時(shí)程的原則。

          四、細(xì)胞重懸:

          1)轉(zhuǎn)染結(jié)束之后,可以先停留10min再加培養(yǎng)基重懸;

          2)使用無鈣培養(yǎng)基重懸,5-10min后轉(zhuǎn)移細(xì)胞到培養(yǎng)皿上;

          3)后續(xù)的實(shí)驗(yàn)一般在轉(zhuǎn)染后24h再進(jìn)行;

          4)電轉(zhuǎn)后的細(xì)胞,鋪板數(shù)量翻一倍。

          更多有關(guān)如何提高電轉(zhuǎn)效率的問題,請聯(lián)系天津益元利康生物科技有限公司:



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