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血樣的加熱滅活處理可導(dǎo)致生物標(biāo)志物的錯(cuò)誤識(shí)別
血漿定量核磁共振波譜法(qNMR)已被用于系統(tǒng)地研究樣品收集和制備過程中不同的處理方式對(duì)代謝分析結(jié)果的影響。
研究人員采用不同大小、不同防腐類型的采血管收集了健康志愿者和新冠病毒感染者的血漿樣本并在一系列的溫度條件下儲(chǔ)存了不同的時(shí)長。使用布魯克Avance IVDr,即核磁共振代謝分析系統(tǒng),利用基于1H-NMR的血漿代謝組學(xué)對(duì)樣本進(jìn)行了分析。
樣本制備方法根據(jù)布魯克IVDr的標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行,NMR分析由該系統(tǒng)的B.I.Methods 2.0全自動(dòng)地完成,脂蛋白亞類定量分析由其中的B.I.LISA模塊獲得。
詳細(xì)研究了采血管尺寸、防腐劑類型、連續(xù)凍融周期、短期和長期樣品儲(chǔ)存溫度以及加熱處理對(duì)脂蛋白和代謝物定量結(jié)果的影響。
核磁共振數(shù)據(jù)表明,采血管的選擇對(duì)代謝分析結(jié)果沒有明顯的影響;血漿樣本可在4°C條件下存放長達(dá)48小時(shí)再凍存于 -80°C;樣本即使在4°C條件下存放長達(dá)168小時(shí),代謝信息的變化仍然很小。
然而,與之相反的是,經(jīng)過熱處理(56°C,30分鐘,即在沒有高級(jí)生物安全設(shè)施的實(shí)驗(yàn)室分析血液樣本時(shí),用于滅活新冠病毒的標(biāo)準(zhǔn)程序)的樣本中,代謝物發(fā)生了明顯而復(fù)雜的變化。
這種在分析前采用的樣本滅活方式,已被證明可降解脂蛋白并差異性地改變代謝信息,即滅活處理對(duì)健康受試者和新冠病毒感染者樣本的改變有著顯著的不同。這種差異性的改變意味著,基于滅活血液樣本的代謝分析,可能識(shí)別錯(cuò)誤的生物標(biāo)志物,而真實(shí)的生物標(biāo)志物卻被遺漏。
因此,從加熱處理的樣本中獲得的新冠肺炎相關(guān)的代謝數(shù)據(jù)在很大程度上是無法解釋的,其研究價(jià)值也非常有限。
當(dāng)前基于核磁共振波譜技術(shù)的血漿代謝組學(xué)研究,凸顯了生化數(shù)據(jù)的可靠性如何嚴(yán)重取決于樣本采集、樣本制備和分析過程中所遵循的實(shí)驗(yàn)方案是否科學(xué)合理。