目錄:北京蘭博利德商貿(mào)有限公司>>分子生物學試劑>>內(nèi)切酶>> 快速內(nèi)切酶KpnI
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號 | F5544S |
|---|---|---|---|
| 儲存條件 | -20℃ |
KpnI 快速內(nèi)切酶
產(chǎn)品貨號：F5544S
儲存條件：-20℃
產(chǎn)品組成
組分 | 規(guī)格 |
LabFD™ KpnI | 200 μl |
10× LabFD™ Buffer | 2×1 ml |
10× LabFD™ Color Buffer | 2×1 ml |
產(chǎn)品簡介
LabFD™快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組、能夠在5~15 分鐘內(nèi)精確完成 DNA 切割的高保真限制性內(nèi)切酶，適用于質(zhì)粒 DNA、PCR 產(chǎn)物或基因組 DNA 等的快速酶切。LabFD™ 快速內(nèi)切酶具有如下特點：5~15 分鐘內(nèi)即可完成酶切；共用一種酶切Buffer，大大簡化酶切反應體系；良好的酶活冗余度，輕松應對底物過量或困難模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、連接試劑在LabFD™酶切Buffer 中具有baifenzhibai活性，支持一管化反應，提升“酶切-修飾-連接"的體驗。
建議的反應條件：
1× LabFD™緩沖液；
37℃溫育；
參照“DNA快速酶切流程"配制反應體系。
失活條件
80℃溫育20min。
質(zhì)量控制
功能活性檢測
最shi反應溫度下，在20ul反應體系中，1ul LabFD™ KpnI能夠在15min 內(nèi)*消化1ug λDNA(HindIII digest)。
超長時間溫育檢測
最shi反應溫度下，將1ul LabFD™ KpnI 與 1ugλDNA(HindIII digest)共同溫育3h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，延時酶切可能出現(xiàn)星號活性。
酶切-連接-再酶切檢測
最shi反應溫度下，使用 1ul LabFD™ KpnI消化底物，回收酶切產(chǎn)物。在22℃下使用適量Fast T4 DNA Ligase可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。
非特異性內(nèi)切酶活性檢測
最shi反應溫度下，將1ul LabFD™ KpnI與1ug超螺旋質(zhì)粒DNA共同溫育4h，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質(zhì)粒DNA仍然處于超螺旋狀態(tài)。
藍白斑檢測
將含有單一lacZα基因的載體以1ul LabFD™ KpnI消化，重新連接后轉化入大腸桿菌感受態(tài)細胞，涂布在含有對應抗生素、IPTG 和X-gal的LB培養(yǎng)基平板上。連接正確的產(chǎn)物會生長出藍色菌落，而連接錯誤（即DNA末端切口不完整）的產(chǎn)物將得到白色菌落。對于LabFD™系列限制酶而言，白色菌落比例應小于1%。
3
化工儀器網(wǎng)