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Ni-TED beads 6FF

貨號(hào)：N30250

存儲(chǔ)條件：4-30℃

產(chǎn)品說(shuō)明

LABLEAD的Ni親和層析介質(zhì)屬于一類金屬鰲合介質(zhì)，以高流速瓊脂糖為基質(zhì)，以IDA、NTA、TED為配基，并鰲合金屬離子Ni²⁺而形成的一種親和層析介質(zhì)，因整合方式不同，Ni²⁺離子結(jié)合力也存在細(xì)微差距，在對(duì)不同蛋白的純化過(guò)程中表現(xiàn)出不同的選擇性，廣泛用于His標(biāo)簽蛋白的分離純化，其中Ni-TED beads 6FF可耐受100mM EDTA和10mM DTT。在含有EDTA及DTT的情況下直接進(jìn)行目的蛋白純化，此介質(zhì)的清洗再生工作簡(jiǎn)單，無(wú)需脫鎳直接進(jìn)行NaOH清洗。

技術(shù)指標(biāo)

操作說(shuō)明

Ni-TED Chromrose 6FF可以在實(shí)驗(yàn)室被填裝到中壓層析柱中，以擴(kuò)大產(chǎn)量。將填料填裝到層析柱中，根據(jù)樣本量和填料載量選擇合適的層析柱和柱高。

1. 緩沖液準(zhǔn)備

所用緩沖液需要采用高純水配制，使用前建議用0.45um濾膜過(guò)濾。

平衡緩沖液：0.2M NaCl，50mM Tris-Hcl，0.1mM EDTA，PH=7.4

漂洗緩沖液：0.2M NaCl，50mM Tris-Hcl，0.1mM EDTA，30mM咪唑，PH=7.4

洗脫緩沖液：0.2M NaCl，50mM Tris-Hcl，0.1mM EDTA，500mM咪唑，PH=7.4

2. 樣品準(zhǔn)備

樣品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液進(jìn)行裂解、透析/超濾/G25進(jìn)行緩沖液置換。

樣品過(guò)濾(平均粒徑<45um，用0.22um過(guò)濾；45um<平均粒徑<165um，用0.45um過(guò)濾；平均粒徑>165um，用0.8um過(guò)濾)。

3. 樣品純化

3.1 用3~5CV的純水沖洗出存儲(chǔ)緩沖液；

3.2 用5~10CV的平衡緩沖液平衡層析柱，至流出液電導(dǎo)與pH不變(與平衡液一致)；

3.3 利用泵或者上樣環(huán)上樣；

3.4 上樣完畢后用淋洗緩沖液沖洗10~15CV，至基線穩(wěn)定

3.5 用洗脫緩沖液采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫一般55CV，梯度洗脫可以用一個(gè)小的梯度，例如20倍柱體積來(lái)分離不同結(jié)合強(qiáng)度的蛋白；

3.6 依次用3CV平衡緩沖液，5CV純水，2CV 20%乙醇沖洗層析柱后，置于2~8°C保存。

4. 在位清洗

當(dāng)填料在使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)反壓過(guò)高或者填料上出現(xiàn)明顯污染，需要進(jìn)行在位清洗操作。

4.1 去除強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂蛋白和脂類

方法一: 使用30%異丙醇清洗5~10CV，接觸時(shí)間為15~20min可以去除此類污染物，再用10CV的純水清洗；

方法二: 使用0.3M或0.5M NaOH溶液沖洗填料3CV，然后用1015CV的純水清洗。

4.2 去除離子作用結(jié)合的蛋白

使用1.5M NaCl溶液清洗10~15min，再用10CV純水清洗，清洗好的柱子用2CV的20%乙醇沖洗，置于2~8°C保存

圖 1Ni-TED beads 6FF 純化qing霉素酶發(fā)酵液電泳圖