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LabFect 原代細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑

貨號：T1014

存儲條件：4°C保存，超一個月不用于-20°C儲存，避免反復(fù)凍融。-20℃保存條件下，有效期為1年。

產(chǎn)品說明：

可用來轉(zhuǎn)染 siRNA、miRNA mimics、miRNA inhibitor 等 200bp以內(nèi)的小分子RNA，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞。目前，無論國外還是國內(nèi)，原代細(xì)胞的核酸轉(zhuǎn)染都是個熱點難題，市場還缺乏真正有效的商品化的原代細(xì)胞核酸轉(zhuǎn)染試劑。LabFect 能夠高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細(xì)胞，獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對一些活體寄生蟲幼蟲，LabFect 也能獲得較為理想的轉(zhuǎn)染結(jié)果。對于大多數(shù)原代細(xì)胞，LabFect的細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽性率都在 80%以上，而轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到 10%。LabFect的使用也極其簡便，先將 sRNA與 LabFect室溫混合，再將 siRNA-LabFect混合物直接加入含培養(yǎng)基的細(xì)胞，血清對轉(zhuǎn)染效果沒有影響，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液。

產(chǎn)品特點：

原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染性能：細(xì)胞轉(zhuǎn)染陽性率一般在80%以上，基因敲除效果明顯，肝細(xì)胞 Lamin A/C 基因敲除效lv在95%以上；

極低的細(xì)胞毒性：轉(zhuǎn)染細(xì)胞死亡率不到 10%，大大降低了因細(xì)胞毒性 對實驗結(jié)果的影響；

轉(zhuǎn)染細(xì)胞范圍廣，絕大多數(shù)原代細(xì)胞都能獲得比較理想的轉(zhuǎn)染結(jié)果。

應(yīng)用：

siRNA 轉(zhuǎn)染

miRNA mimics 轉(zhuǎn)染

200bp內(nèi)的小分子RNA轉(zhuǎn)染

操作步驟：

本說明書適用于24孔培養(yǎng)板的轉(zhuǎn)染實驗，其他規(guī)格的培養(yǎng)板的用量參照下面表格，表格給出的是每孔的用量與體積。

1. 細(xì)胞接種：轉(zhuǎn)染前一天接種細(xì)胞，每孔500μl培養(yǎng)基，使細(xì)胞在轉(zhuǎn)染時密度在30-50%，盡量不要使用抗生素。

2. siRNA-LabFect混合物準(zhǔn)備：

a. 12pmol siRNA用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋。

b. 2μl LabFect 用50μl無血清培養(yǎng)基稀釋。輕輕混勻，室溫孵育 5min。注意：確保在25 min內(nèi)執(zhí)行第三步操作，不要過于延遲。

c. 孵育5min后，將siRNA稀釋液與LabFect稀釋液混合（總體積100μl）。輕輕混勻，室溫孵育20 min。

3. 將混合物加到培養(yǎng)的細(xì)胞內(nèi)（wan全培養(yǎng)基培養(yǎng)）：

a. 將100μl混合物加入培養(yǎng)孔內(nèi)，培養(yǎng)孔內(nèi)含有0.5ml培養(yǎng)的細(xì)胞。輕輕晃動培養(yǎng)板，混勻。

b. 37°C 培養(yǎng) 18-72h，檢測基因抑制效果。如果需要，細(xì)胞培養(yǎng) 4-6h 時可以更換培養(yǎng)基，但不是必須。孵育時間的長短，取決于細(xì)胞類型、 所干擾基因本身及分析方法?？稍O(shè)置不同的孵育時間進(jìn)行實驗以確定最佳孵育時間。

轉(zhuǎn)染實驗優(yōu)化：為了提高轉(zhuǎn)染效lv，最好對轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化，特別是首ci使用。例如：24孔培養(yǎng)板，調(diào)整siRNA與LabFect試劑的用量。siRNA用量在在 6、12、18、24、30 pmol (final concentration 10-50 nM)之間調(diào)整，LabFect試劑用量在1.0-3.0μl之間調(diào)整。

轉(zhuǎn)染實驗要點：

轉(zhuǎn)染過程盡量不要使用抗生素，否則會導(dǎo)致細(xì)胞死亡增加；

首ci實驗 siRNA 的用量設(shè)置在終濃度 10nM、20nM、30nM、40 nM、50 nM 進(jìn)行摸索 ，后續(xù)實驗根據(jù)實驗結(jié)果修改。

質(zhì)量控制

本產(chǎn)品經(jīng)嚴(yán)格的質(zhì)量檢驗證明，無生物污染

注意：

本產(chǎn)品僅用于科研實驗

LabFect Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels