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| 參考價(jià) | 286 |
參考價(jià)：￥ 286
500U
| 500U | 286元 | 999U可售 |
更新時(shí)間：2023-11-10 18:17:59瀏覽次數(shù)：175評(píng)價(jià)
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號(hào) | LT0201 |
|---|
Long Taq DNA Ploymerase
貨號(hào)：LT0201
儲(chǔ)存溫度：-20。C，濃度5U/ul。
產(chǎn)品組成、濃度
目錄編號(hào) | LT0201-500U | LT0201-3000U |
LongTaq DNA Ploymerase | 500U | 3000U |
10xLongTaqBuffer （2.5mM Mg2+ Plus） | 1ml | 6*1ml |
產(chǎn)品介紹
一般PCR法具有一定的局限性，特別是難以擴(kuò)增5kb以上的長(zhǎng)鏈DNA，這嚴(yán)重限制了PCR法的推廣和應(yīng)用。通過(guò)改變PCR用DNA聚合酶、PCR用Buffer、PCR擴(kuò)增條件等，使長(zhǎng)鏈DNA的擴(kuò)增成為可能，這就是LA（Long and Accurate）PCR技術(shù)。本試劑盒所用的Long Taq是Taq聚合酶和有矯正作用的聚合酶的混合物，這種聚合酶可以染色體和其他細(xì)胞器的DNA為模板高效進(jìn)行PCR反應(yīng)。在人的染色體上可以擴(kuò)增長(zhǎng)度可達(dá)27kb的DNA片段，而以λDNA為模板則可擴(kuò)增出高達(dá)40kb的片段。
適用范圍
一般用于DNA片段的PCR擴(kuò)增、DNA標(biāo)記、引物延伸、序列測(cè)定、DNA平末端加A等，產(chǎn)物可直接用于TA克隆。
建議循環(huán)條件
步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù)目 |
預(yù)變性 | 94。C | 1-2min | 1 |
變性 | 94。C | 10-20sec | 10 |
退火 | 65。C（視引物而定） | 30sec | |
延伸 | 68。C | 45-60sec/kb* | |
變性 | 94。C | 10-20sec | 15-20 |
退火 | 65。C（視引物而定） | 30sec | |
延伸 | 68。C | 45-60sec/kb +1-20sec“自動(dòng)延長(zhǎng)"/循環(huán)* | |
最后延伸 | 68。C | 10min | 1 |
*擴(kuò)增大片段尤其是20kb以上的片段建議15-30個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)的延伸時(shí)間要增加10-15sec“自動(dòng)延伸"時(shí)間，如果PCR儀器沒(méi)有“自動(dòng)延時(shí)"功能，那么設(shè)定延伸時(shí)間建議在原有基礎(chǔ)上增加1-4min。
PCR片段長(zhǎng)度（kb） | 延伸時(shí)間（min） | 自動(dòng)延長(zhǎng)/循環(huán)（sec） |
3 | 2 | 1 |
6 | 4 | 2 |
10 | 7 | 5 |
15 | 10 | 5 |
20 | 14 | 10 |
25 | 17 | 10 |
30 | 20 | 15 |
35 | 24 | 15 |
40 | 27 | 20 |
45 | 30 | 20 |
注意事項(xiàng)：
1.10xLong Taq Buffer pH值較高，可能會(huì)形成【Mg(OH)2】沉淀，使用蒨要充分溶解，并用Votex保證可能的沉淀重新溶解，或者37。C溫育5min，然后Votex充分混勻。
2. 擴(kuò)增長(zhǎng)片段建議使用0.2ul薄壁管。其他試管未經(jīng)測(cè)試。較厚的試管在92。C時(shí)不能有效的使模板變性。變性時(shí)，盡可能縮短變性時(shí)間，降低變性溫度。第一步變性在92。C-94。C下進(jìn)行2min（GC含量高可能延長(zhǎng)時(shí)間達(dá)5min）。再循環(huán)過(guò)程中盡可能縮短變性時(shí)間（92。C-94。C下進(jìn)行10-15s），除非模板中富含GC，則95。C下變性30s，這可以防止DNA脫嘌呤和鏈斷裂，對(duì)于所需擴(kuò)增的基因組DNA片段中長(zhǎng)度超過(guò)12kb時(shí)，應(yīng)盡可能降低變性溫度和時(shí)間。變性需要的時(shí)間在不同PCR儀上稍有不同。
3. 如果擴(kuò)增片段GC含量高或者擴(kuò)增片段比較長(zhǎng)，可在反應(yīng)混合物中加入DMSO到終濃度1%-8%，zui常用2%（小于30kb）或者4%（大于30kb）往往會(huì)改善擴(kuò)增效果。
4. 擴(kuò)增長(zhǎng)片段，引物一般終濃度為0.3-1uM，長(zhǎng)度最好為27-36bp；退火溫度一般在65。C-70。C，此時(shí)退火溫度和延伸溫度基本一致，可將退火延伸在一個(gè)溫度進(jìn)行，使用2階段擴(kuò)增法。當(dāng)然如果設(shè)計(jì)的引物在20bp左右，則還是使用傳統(tǒng)3階段擴(kuò)增法。
5. 模板一般使用0.01-2.5ng(λ phage)或者0.1-1ug（human）。
6. 1xLong Taq buffer中Mg2+濃度為2.5mM，建議dNTP濃度為400mM，要得到最佳結(jié)果，優(yōu)化Mg2+是必須的。如果含有較高的EDTA或螯合劑，則應(yīng)該提高M(jìn)g2+；如果要增加dNTP濃度，相應(yīng)的也要增加Mg2+濃度。
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