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原代細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染試劑

貨號(hào)：T2120

存儲(chǔ)條件：: 4-8℃保存，有效期一年。每次使用之前請(qǐng)先將本品上下顛倒混勻。

產(chǎn)品說(shuō)明：

LabFect Plasmid原代細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑是專(zhuān)門(mén)用于原代細(xì)胞質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染試劑。LabFect Plasmid 具有非常卓yue的轉(zhuǎn)染性能，可高效轉(zhuǎn)染多種原代細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率高達(dá)70% 以上（EGFP質(zhì)粒）。LabFect Plasmid不僅可轉(zhuǎn)染較大分子的質(zhì)粒DNA，還可轉(zhuǎn)染RNA和小分子DNA。與目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑不同，LabFect Plasmid 采用生物可降解材料配制，對(duì)細(xì)胞的毒性很低，轉(zhuǎn)染后細(xì)胞死亡率不到10%。LabFect Plasmid 使用也非常方便，先將轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)粒DNA混合，再將轉(zhuǎn)染試劑-DNA復(fù)合物直接加入培養(yǎng)細(xì)胞中，血清不影響其轉(zhuǎn)染效果，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液，操作十分簡(jiǎn)便。。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

卓yue的細(xì)胞轉(zhuǎn)染性能：可高效轉(zhuǎn)染多種原代細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率高達(dá)70%以上；

極低的細(xì)胞毒性：使用可降解生物材料，細(xì)胞毒性低，轉(zhuǎn)染細(xì)胞死 亡率不到10%，大大降低了因細(xì)胞毒性對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié) 果更為客觀；

操作簡(jiǎn)便，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染前后不需要更換培養(yǎng)液。

注意事項(xiàng)：

因細(xì)胞密度隨細(xì)胞系不同會(huì)有很大差別，且細(xì)胞密度直接決定轉(zhuǎn)染效率，因此請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染過(guò)程中盡量保持同樣的接種比例，以提高轉(zhuǎn)染重復(fù)性。多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞應(yīng)在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)。其他的一些細(xì)胞系，例如昆蟲(chóng)細(xì)胞，需要在不同的溫度和CO2濃度下進(jìn)行培養(yǎng)。請(qǐng)根據(jù)具體細(xì)胞系選擇最shi培養(yǎng)條件。應(yīng)避免包裝反應(yīng)體系中存在血清，因血清會(huì)干擾LabFect與DNA形成復(fù)合物 。如果轉(zhuǎn)染DNA量較大或者當(dāng)復(fù)合物包裝時(shí)反應(yīng)體系中出現(xiàn)沉淀時(shí), 請(qǐng)將包裝反應(yīng)體系調(diào)整至1ml進(jìn)行。

適用細(xì)胞系：大鼠肝細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡上皮 細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、大腸癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞等

試劑盒內(nèi)容物：LabFect原代細(xì)胞小核酸轉(zhuǎn)染試劑

方法步驟（以24孔板轉(zhuǎn)染為例）:

1. 細(xì)胞接種:

a. 轉(zhuǎn)染前24小時(shí)左右對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鋪板（不含抗生素），培養(yǎng)過(guò)夜；

b. 確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度達(dá)90%-95%。

2. LabFect/DNA復(fù)合物包裝(該步完成后應(yīng)立即轉(zhuǎn)染):

a. 在1.5 ml無(wú)菌離心管中加入50µl無(wú)血清培養(yǎng)基，并添加適量的轉(zhuǎn)染試劑(參見(jiàn)附表) 。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。

b. 在1.5 ml無(wú)菌離心管中加入50µl無(wú)血清培養(yǎng)基，并添加適量的 DNA，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。 (參見(jiàn)附表。首ci使用建議在附表提供的DNA和轉(zhuǎn)染試劑參考量的基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，以摸索兩者之間的最you搭配比例)。

c. 將LabFect-培養(yǎng)基混合物滴加至DNA-培養(yǎng)基混合物中，用移液器 輕輕混勻后在室溫靜置15~20分鐘后，立即轉(zhuǎn)染。注意： LabFect-培養(yǎng)基混合物和DNA-培養(yǎng)基混合物的混合次序非常重要，切勿顛倒。

3. 轉(zhuǎn)染:

注意：LabFect在*培養(yǎng)基中(基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加血清)具有最gao的轉(zhuǎn)染效率，因此轉(zhuǎn)染前后不需要換成無(wú)血清培養(yǎng)基。 a. 如特殊情況，可在轉(zhuǎn)染開(kāi)始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基，以防轉(zhuǎn)染后孵育階段細(xì)胞密度太大、營(yíng)養(yǎng)不足導(dǎo)致的細(xì)胞死亡。

b. 將步驟2制備的復(fù)合物滴加至培養(yǎng)基中。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿以使復(fù)合物均勻分布。

c. 培養(yǎng)4h后，加入1ul溶液A，輕搖混勻（此步可選，溶液A另購(gòu)）。

d. 過(guò)夜培養(yǎng)24~48小時(shí)。

e. 注意:如果轉(zhuǎn)染后需要更換新鮮培養(yǎng)基，請(qǐng)于加入LabFect/DNA復(fù)合物12~24小時(shí)后進(jìn)行。培養(yǎng)基更換后，孵育24~48小時(shí)后再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

f. 收獲細(xì)胞，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

質(zhì)量控制

本產(chǎn)品經(jīng)嚴(yán)格的質(zhì)量檢驗(yàn)證明，無(wú)生物污染

注意：

本產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)

附表：不同培養(yǎng)體系推薦初始轉(zhuǎn)染條件